ГОСТ 32015—2012
метил-трет-бутилового эфира флаконы с образцами помещают на центрифугу и центрифугируют при
3000 об/мин в течение 3 мин. Объединенные эфирные экстракты упаривают на ротационном испарите ле
досуха. Сухой остаток растворяют в 4 см3метанола, затем приливают 1 см3деионизованной воды и
обезжиривают два раза по 3 см3 н-Гексаном. Водно-метанольную фракцию очищают методом
твердофазной экстракции (ТФЭ). а затем методом ВЭЖХ.
Если интересующие компоненты представлены в виде эфиров (например, гестагены или ацетат
тренболона). дополнительно проводят их щелочной гидролиз. Для этого сухой остаток растворяют в
0.2 см1щелочного раствора для гидролиза (6.3.2) и помещают на нагревательный модуль при темпера
туре 37 X на 30 мин. Гидролиз останавливают добавлением 1см3 «кислого» буферного раствора (6.3.4) и
обезжиривают два раза по 3 см3н-Гексаном.
7.1.2 Пробу печени или почек измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на лабораторных ве
сах по 5.0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью по 40 см3. Во флаконы добавля
ют по 15 см3 ацетатного буферного раствора (6.3.3) и 50 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia.
Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3раствора дейтерированных стандартных образцов массовой
концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на нагревательный модуль при температуре 37 X на 15 ч для
ферментативного гидролиза коньюгатов стероидов. После гидролиза флаконы с образцами охлаждают
до комнатной температуры, добавляют 2 см3соляной кислоты и экстрагируют два раза по 15
см3ме-тил-трот-бутиловым эфиром. При неполном отделении метил-трет-бутилового эфира флаконы с
образ цами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин.
Объединенные эфирные экстракты переносят в круглодонную колбу и упаривают на ротационном
испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в4 см3метанола, затем приливают 1см3деионизованной
воды иобезжирива ют два раза по 3 см3 н-Гексаном. Водно-метанольную фракцию очищают методом
ТФЭ (7.2). а затем методом ВЭЖХ (7.3).
7.1.3 Во флакон вносят 10см3 мочи, 10 см3ацетатного буферного раствора (6.3.3) и 100 мм3пище
варительного сока Helix pomatia. Пипеточным дозатором вносят 50 мм3 раствора дейтерированных
стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на нагревательный модуль
при температуре 52 X на 15 ч для ферментативного гидролиза коньюгатов стероидов. Энзиматический
гидролизат охлаждают до комнатной температуры и очищают методом ТФЭ (7.2). а затем методом
ВЭЖХ (7.3).
7.1.4 Во флакон вносят5 см3желчи, 15см3 ацетатногобуферного раствора (6.3.3) и 100 мм3пище
варительного сока Helix pomatia. Далее проводят обработку пробы в соответствии с 7.1.3.
7.1.5 5 г жира взвешивают на лабораторных весах в стеклянном флаконе вместимостью 40 см3.
Во флакон добавляют 20 см3и-Гексана и 10 см3ацетонитрила. Пипеточным дозатором вносят 50 мм3
раствора дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3. Помещают фла
кон на ультразвуковую баню на 15 мин. до полного растворения жира. Затем интенсивно перемешивают,
флакон с образцом помещают на центрифугу и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин.
Ацетонитрильную фракцию отбирают и повторяют жидкостно-жидкостную экстракцию 10 см3ацетонит
рила. Объединенные ацетонитрильные фракции упаривают досуха на ротационном испарителе. Сухой
остаток растворяют в 1 см3метанола, а затем приливают 1 см3деионизованной воды и обезжиривают
два раза по 3 см3 н-Гексаном. Водно-метанольную фракцию очищают методом ТФЭ (7.2), а затем
методом ВЭЖХ (7.3).
7.1.6 100 г кормов измельчают на гомогенизаторе ивзвешивают на лабораторных весах по5.0 г го
могенизированной пробы вдвух флаконах вместимостью по 40 см3. Во флаконы добавляют 20 см3рас
твора метанола идеионизованной воды, взятых в соотношении 80 : 20. и пипеточным дозатором вносят по
50 мм3раствора дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3. Поме щают
флаконы на ультразвуковую баню на 20 мин. Затем интенсивно перемешивают, флаконы с образ цами
помещают на центрифугу и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочный слой
обезжириваютдва раза по5 см3н-Гексана иупаривают на ротационном испарителе при температу ре 40
X до окончания упаривания метанола. Водный остаток очищают методом ТФЭ (7.2). а затем методом
ВЭЖХ (7.3).
7.2 Очистка методом твердофазной экстракции
Картриджи для ТФЭ объемом 12 см3 с 1 г сорбента С18 40 мкм кондиционируют на вакуумном
устройстведля ТФЭ, пропуская последовательно 10 см3метанола и 4 см3деионизованной воды. К вод-
но-метанольному экстракту, полученному после стадий экстракции в соответствии с 7.1.1—7.1.6. прили
вают 15 см3деионизованной воды и пропускают через кондиционированный картридж со скоростью
9