ГОСТ ISO 21527-2-2013
Исходную суспензию и разведения встряхивают во избежание осаждения частиц, содержащих
микроорганизмы.
9.2 Инокуляция и инкубация
9.2.1 На одну агаровую пластину с DG18 (5.2.1) переносят с помощью стерильной пипетки (6.2)
0.1 см3 испытуемого образца, если это жидкость, или 0.1 см3 исходной суспензии в случае других
продуктов (раздел 8).
На вторую агаровую пластину с DG18 переносят с помощью отдельной стерильной пипетки
0.1 см3первого десятикратного (10 ’) разведения (жидкий продукт) или 0,1 см3разведения 10‘2(другие
продукты).
Для облегчения подсчета колоний дрожжевых и плесневых грибов, содержащихся в низких
концентрациях, разведения пробы 101или испытуемого жидкого образца объемом до 0.3 см3 можно
нанести на три чашки Петри.
Эти процедуры повторяют с последующими разведениями, используя отдельную стерильную
пипетку для каждого десятикратного разведения.
Для сыпучих или твердых пищевых продуктов, например орехов или зерен, рекомендуется
прямой посев на чашки. Образцы продуктов этого типа подвергают поверхностной дезинфекции в
растворе гипохлорита натрия концентрацией 0.35 % (1000 мкг/г) при продолжительности контакта 2
мин. затем промывают стерильной дистиллированной водой, сушат на стерильной бумаге и
помещают на твердые среды (2), [6].
9.2.2 Жидкость распределяют по поверхности агаровой пластины стерильным шпателем (6.8),
до тех лор. пока она не будет полностью абсорбирована в среду.
Для инокуляции чашек можно также использовать метод глубинного посева, но в этом случае
дифференцирование плесневых и дрожжевых грибов затруднительно и эквивалентность результатов
должна быть подтверждена сравнением с результатами поверхностной инокуляции. Метод нанесения
на поверхность может давать более высокие результаты подсчета, поскольку он обеспечивает
максимальное воздействие атмосферного кислорода на клетки микроорганизмов и предотвращает
риск их тепловой инактивации. Результаты могут зависеть от типа грибов.
9.2.3 Приготовленные чашки (9.2.2) инкубируют в аэробных условиях крышками вверх, в
горизонтальном положении в термостате (6.1) при температуре (25 ± 1) вС от пяти до семи дней. При
необходимости чашки выдерживают на рассеянном свету от одного до двух дней.
Если имеется подозрение на присутствие
Xeromyces bisporus.
то инкубацию чашек проводят в
течение 10 дней.
Рекомендуется инкубировать чашки (6.6) в открытом пластмассовом пакете во избежание
загрязнения термостата в случае разрастания плесневых грибов из чашек.
9.3 Подсчет и отбор колоний для подтверждения
После завершения периода инкубации отбирают чашки (9.2.3), содержащие менее 150 КОЕ. и
подсчитывают их. Если возникают трудности из-за быстрорастущих плесневых грибов, КОЕ
подсчитывают через два дня инкубации и вновь через пять-семь дней.
П р и м е ч а н и я
1 Методы подсчета дрожжевых и особенно плесневых грибов не являются достаточно точными, поскольку
инокулят состоит из смеси мицелия и спор бесполого и полового размножения. Количество колониеобразующих
единиц зависит от степени фрагментации мицелия и соотношения спор, способных расти на питательной среде.
2 Часто имеет место нелинейность подсчетов при инокуляции с использованием разведений, то есть 10-
кратные разведения часто не дают 10-кратного уменьшения количества колоний, выросших на питательной
среде. Это связано с фрагментацией мицелия и разрушением скоплений спор во время приготовления
разведений, а также с конкурентным ингибированем на чашках с большим количеством колоний.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Споры плесневых грибов рассеиваются в воздухе с большой легкостью,
поэтому при работе с чашками Петри следует соблюдать осторожность во избежание развития
вторичных (сателлитных) колоний, которые дают завышенную оценку популяции в образце.
При необходимости проводят исследование с помощью бинокулярной лупы (6.9) или микроскопа
(6.7) для различения клеток дрожжевых, плесневых грибов и бактерий из колоний.
При необходимости подсчитывают колонии дрожжевых и плесневых грибов по отдельности.
Для идентификации дрожжевых и плесневых грибов выделяют области грибного роста, которые
используют для микроскопического исследования при большом увеличении или пересева на
подходящую дифференциально-диагностическую или селективную среду.
10 Обработка результатов и допустимые пределы
Обработка результатов и допустимые пределы - по ISO 7218.
5