ГОСТ ISO 21527-2-2013
- ферментный гидролизат казеина - 5.0 г.
- D-глюкоза (СбН,20 6) - 10,0 г;
- дигидрофосфат калия (КН2Р04) - 1.0 г;
- сульфат магния (MgS04 • Н20 ) - 0.5 г;
- дихлоран (2,6-дихлор-4-нитроанилин) - 0.002
г;
- глицерин безводный - 0.025 г:
- агар - 12 до 15 г 2’;
- хлорамфеникол - 0.1 г;
- вода, дистиллированная или деионизированная - 1 000 см3.
5.2.1.2 Приготовление
5.2.1.2.1 Общие вопросы
Суспендируют в воде все ингредиенты, кроме хлорамфеникола. и доводят до кипения для
полного растворения. При необходимости регулируют pH так. чтобы после стерилизации он был
равен (5.6 ± 0,2) од. pH при температуре 25 °С.
Добавляют 10 см3 1 % - ного раствора хлорамфеникола (массовая концентрация) в этаноле и
перемешивают. Разливают среду в емкости (6.5) подходящей вместимости. Стерилизуют в автоклаве
при температуре 121 еС в течение 15 мин.
Затем среду немедленно охлаждают в водяной бане (6.3), поддерживающей температуру
от 44 °С до 47 °С. Охлаждают до температуры ниже 50 °С и распределяют по 15 см3 в стерильные
чашки Петри (6.6).
Оставляют среду до затвердевания и при необходимости сушат поверхность чашек, как описано
в ISO 7218. ISO/TS 11133 (все части).
Среды используют немедленно или хранят в темноте согласно ISO/TS 11133 (все части).
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Следует избегать воздействия света на среду, поскольку образующиеся
цитотоксические продукты распада могут привести к недооценке микофлоры в образцах.
5.2.1.2.2 Факультативное добавление гидрохлорида хлортетрациклина
При возникновении сложностейиз-зачрезмерного бактериальногороста (например, при
использовании сырого мяса), рекомендуется использовать хлорамфеникол
хлортетрациклин (50 мг/дм3). В этом случае приготовляют среду, как описано
(50 мг/дм3) и
выше, только с
использованием 50 мг хлорамфеникола. распределяют ее по 100 см3 и стерилизуют. Готовят также
раствор 0,1 % - ного гидрохлорида хлортетрациклина (массовая концентрация) в воде (будучи
относительно неустойчивым в растворе, он должен быть свежеприготовленным) и стерилизуют
фильтрацией. Непосредственно перед использованием добавляют 5 см3 этого раствора асептически к
100 см3 основной среды и разливают в чашки. Использование гентамицина не рекомендуется, так как,
согласно представленным данным, он вызывает ингибирование некоторых видов дрожжевых грибов
[1].
5.2.1.2.3 Факультативное добавление микроэлементов
Для получения полноценной морфологической картины у плесневых грибов, в частности для
образования свойственных им пигментов, грибы нуждаются в микроэлементах, которые могут
отсутствовать в DG18. Чтобы идентифицировать плесневые грибы на этой среде, перед
стерилизацией среды в автоклаве добавляют в нее раствор следующих микроэлементов в объеме 1
см3 на 1 дм3 среды: ZnS04 7Н201 г, CuS04- 5Н20 0.5 г; вода дистиллированная или
деионизированная. 100 см3(6).
5.2.1.3 Испытание рабочих характеристик для гарантии качества питательной среды
5.2.1.3.1 Общие вопросы
DG18 является плотной средой. Продуктивность и селективность испытывают no ISO/TS 11133-
1 и ISO/TS 11133-2 со следующими техническими условиями:
5.2.1.3.2 Продуктивность
Инкубация: пять дней при (25 ± 1) °С.
Штаммы:
Saccharomyces cerevisiae
АТСС 9763;
Wallemia sobi
АТСС 42694:
Aspergillus restrictus
АТСС 42693;
Eurotium rubrum
АТСС 42690 или штаммы, зарегистрированные как эквивалентные в других
семействах грибов.
Эталонные среды: партия сред SDA (D-глюкозный агар Сабуро), уже валидированных.
Контрольный метод: количественный.
Критерии: коэффициент продуктивности. PRг 0.5.
’Допускается использование Сабуро агара, агара Чапека, глюкозо-хлорамфеникол агара.
21 В зависимости от плотности геля агара.
3