ГОСТ 31960-2012
Затем, используя счетную камеру Горяева, под микроскопом подсчитывают (см. Д.В.1) в каждой колбе не
менее чем вдвух повторностях плотность (численность) клеток водорослей, и рассчитывают среднеарифме
тическое значение (х). После этого, в соответствии с инструкцией (руководством) по эксплуатации прибора, в
каждой соответствующей колбе измеряют не менее трехраз значения интенсивности флуоресценции В-. и
подсчитывают среднеарифметическое значение.
При ме ча ни е - Измерения флуоресценции необходимо проводить сразу после подсчета клеток каж
дого заданного разведения (концентрации) в камере Гэряева.
По полученным значениям х, (по Д.В.1) иВ; строят градуировочный графикв виде функциональной зависи
мости Вг от хг используя компьютерную систему сбора и обработки данных.
При отсутствии компьютерных систем сбора иобработки данных функциональную зависимость В,от х,
устанавливают по угловому коэффициенту (наклону) Ь. отн.ед. см3/кл, рассчитываемомупо формуле
1Х А В ,
ь = ^ ---------.(Д.В.2)
К *,)2
i»1
гдеX, - плотность (численность) клеток водорослей в t-м градуировочном растворе, клеток/см3;
ЛВ(- разница междузначениями £3интенсивности флуоресценции i-го градуировочногораствора за
вычетом срвднеарифштического значения интенсивности флуоресценции холостой пробы:
i - число использованных градуировочныхрастворов (см. Д.В.2.3).
При ме ча ни е - Гоадуировочный график должен иметь линейную зависшмсть. в противном случае
следует установить причину, заново приготовить градуировочные растворы и повторить градуировку.
Д.В.2.6 Контроль стабильности градуировочной характеристики
1
Периодически, но нереже двухраз в год. проводят контроль градуировочнойхарактеристики сиспользо
ванием градуировочныхрастворов поД.В.2.4.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если сохраняются угол наклона градуировочного
графика и линейная зависимсть интенсивности флуоресценции от плотности (численности) клеток градуи
ровочных растворов.
Д.В.2.7 Порядок проведения измерений
Д.В.2.7.1 Определение плотности (численности) клеток водорослей после культивирования
Колбу с подготовленными по приложению Д.А водорослями (для метода А - по Д.А.1: для метода Б - по
Д.А.2). закрывают ватно-марлевой пробкой, встряхивают вручную. вь(держивают 30 мин при температуре:
(20±2)°С (дляметода А) или (23±2)°С (дляметода Б) иосвещенности: 3000- 4000лк (для метода А) или 6000-7000лк
(для метода Б), зател»сноваперемешивают и из колбыавтоматическойпипеткойпереносят в кварцевую
кюветуприбора аликвотусуспензииводорослей, равную объемукварцевой кюветы, кюветыс аликвотойсуспензии
водорослейпомещаютв кач*вруприбора для измеренияинтенсивностифлуоресценции суспензии водорослей.
Порядок проведения измерений - по Д.В.2.7.
Определение значении плотности (численности) клеток водорослей - поД.В.2.8.
Д.В.2.7.2 Определение начальной плотности (численности) клеток водорослей перед тестированием
Конические колбы с пробами, подготовленными по 5.4.3.1 и 5.4.3.2, а также с пробами, подготовленными
по Д.В.2.1. закрывают ватно-марлевыми пробками, встряхивают вручную, после чего помещают в климато-
стат и выдерживают 15 мин при температуре: (20 ± 2) °С (для метода А) или (23 ± 2) °С (для метода Б) и
освещенности: 3000 - 4000 лк (для метода А) или 6000 - 7000 лк (для метода Б).
После выдерживания колб в климатостате, каждую колбу (включая колбы с холостой и контрольной про
бами) встряхивают вручную. Затем из конкретной колбы отбирают автоматической пипеткой аликвоту про
бы. равную объему кварцевой кюветы прибора, кювету с аликвотой пробы помещают в камеру прибора для
изчАврения интенсивности флуоресценции клеток водорослей.
Порядок проведения измерений - по Д.В.2.7.
Определение значенийплатности (численности) клеток водорослей- поД.В.2.8.
Д.В.2.7.3 Определение плотности (численности) клеток водорослей после тестирования
После проведения тестированиякаждуюколбу (включаяколбы с хо/юстой и контрольной пробами) встря
хивают вручную. Затем изконкретной колбы с пробой отбирают автоматической пипеткой аликвоту пробы,
равную объему кварцевой кюветы прибора, кювету с аликвотой пробы помещают в каглеру прибора для изме
рения интенсивности флуоресценции клеток водорослей.
Порядок проведения измерений - по Д.В.2.7.
Определение значений плотности (численности) клеток водорослей - аналогично Д.В.2.8.
29