ГОСТ 31960-2012
ПРИЛОЖЕНИЕ Д.А
(обязательное)
Методы культивирования водорослей
Д.А. 1 Культивирование водорослей для метода А
Д.А. 1.1Культивирование водорослей проводят в конических колбах вместимостью 250 см3на питатель
ной среде Гзльдберга в условиях, соответствующих условиям проведения тестирования проб по 5.4.3.3.
Д.А. 1.2 Культивируя водоросли, периодически обновляют маточную культуру, пересевая ее на свежепри
готовленнуюпитательную среду[см. А. 1.2(приложениеА)]нереже одногораза в Юсут. Обновление культуры
проводят следующим способом: в стерильную колбу вместиглостью 250 см3 со свежей питательной средой
обьемом 150 слг* над пламенел! спиртовки вносят 15-20 см3 верхнего ростового слоя маточной культуры
(содержимое исходной культуры при этом не перемешивают). После пересева колбу закрывают стерильной
ватно-марлевой пробкой и бумажным колпачком, перемешивают и вьЮерживают вусловиях по 5.4.3.3. Приэтом
плотность (численность) клеток водорослей вколбе должна составлять около 1.0- /О5- 1.5- 1&клеток/см3. В
течение Юсут водорослипериодически перемешивают, встряхивая колбы вручную один - два раза в сутки.
В случае замедления роста клеток водорослей к питательной среде добавляют витамин В}2 (одну или
две капли на 1дм3среды).
Д.А. 1.3Для тестирования используют культуру водорослей в экспоненциальной фазе роста и заданной
плотности (численности) клеток водорослей. Для этого за 3 сут до начала тестирования в колбу вмести
мостью 250 см3 со свежей питательной средой обьемом 100
с
а
г
над пламенем спиртовки вносят 20 см3 су
спензии водорослей из маточной культуры (см. Д.А. 1.2). Затем колбу закрывают стерильной ватно-марлевой
пробкой и бумажным колпачком, перемешивают вручную и выдерживают вусловиях по 5.4.3.3 в течение 3 сут.
При этом плотность (численность) клеток водорослей в подготовленной к тестированию культуре должна
находиться в пределах от 2.0 -1Ф до 2.5 ■1(fi клеток/см3.
Д.А. 1.4 Непосредственно перед тестированием вподготовленной поДА. 1.3трехсуточной культуре во
дорослей определяют в соответствии с требованиями Д.В.1 (приложение Д.В) плотность (численность) кле
ток в 1см3суспензии водорослей, используя для этого не менее двух аликвот суспензии. Полученное значение
плотности (численности) клеток водорослей должно находиться в пределах от 2 ■1(fi до 2.5 • 1Срклеток/см3.
Если полученное значение менее 2.0 ■1(Р клеток/см3. то увеличивают продолжительность культивирования
водорослей (см. ДА. 1.3) еще на сутки. Затем рассчитывают необходимый объем суспензии для внесения в
каждую колбу с контрольной и анализируемой пробой при тестировании.
При ме ча ни е - Чтобыполучить в начале тестированияплотность (численность) клеток водорослей
в пределах от 2- 10хдо 2.5 ■10хклеток/см3. достаточно в каждую емкость внести 1.0см3суспензии водорослей
из культуры, плотность (численность) которой находится в пределахот 2 - 1(Р до 2.5 - 1Cfiклеток/см3.
Д.А.2 Культивирование водорослей для метода Б
ДА.2.1 Культивирование водорослейпроводят в конических колбах вмеслюмостью 250 см3на питатель
ной среде [см. А.2.2 (приложение А)] в условиях тестирования по 6.4.1.
ДА.2.2 Необходим регулярный пересев культур водорослей, для Sceletonema costalum (Greville) Cleve его
осуществляют один раз в 7 сут. для Phaeodactyium tncomulum Bohlin - один раз в 14 или 21 сут. При этом пере сев
культур водорослей проводят аналогично ДА. 1.2 в условиях по 6.4.1 с использованием питательной среды по
А.2.2 (приложение А).
ДА.2.3 Для тестирования культуру водорослей готовят следующим способом: в питательную среду
[см. А.2.2 (приложение А)) добавляют такой объем суспензии водорослей из маточной культуры водорослей
(см. Д.А.2.2), чтобы получить начальную плотность (численность) клеток, соответствующую диапазону от 2.0 • 103
до 104 клеток/см3. и выдерживают в условиях тестирования по 6.4.1 в течение 3 сут.
ДА.2.4 Культура водорослей, подготовленная по Д.А.2.3 в течение тестирования должна обеспечить экс
поненциальный рост водорослей. Непосредственно перед тестированием определяют плотность (численность)
клеток в подготовленной культуре водорослей в соответствии с требованиями Д.В. 1(приложениеД.В) и рассчи
тывают необходимый объем суспензии водорослей для внесения в каждую колбу с контрольной и анализируемой
пробой для тестирования.
Д.А.З Адаптация водорослей к воде различной минерализации (солености)
1
ДА.3.1 Природная морская вода в разных *орях и отдельных акваториях моря имеет различную мине
рализацию (соленость), поэтому необходимо иметь культуру водорослей, заранее адаптированную к разной
минерализации (солености) анализируемой пробы воды (водной вытяжки), подлежащей тестированию и содер
жать ев в заданных условиях для культивирования.
20