ГОСТ 31960-2012
За результат подсчета плотности (численности) клеток водорослей принимают среднеарифметическое
значениене менее двух определенийдля каждой заданнойкратности разбавления (концентрации) анализируемой
пробы,
в том числе и контрольной пробы, которое вычисляют с допускаемым отклонением не более ±7%.
Д.В.2 Определение плотности (численности) клеток водорослей с использованием
метода флуоримвтрии
Д.В.2.1 Приготовление проб
Д.В.2.1.1 Приготовление холостойпробы
Холостую пробу готовят следующим образом: в конические колбы вместимостью 250 см3вносят 100
см
3
питательной среды, приготовленной в соответствии с требованиями приложения А (для метода А - лита
тельная среда Гэльдберга поА. 1: для метода Б - питательная среда no А.2).
Д.В.2.1.2 Приготовление пробы контроля фона
Для
каждой
анализируемой пробы подготавливают пробу
контроля фона, представляющую собой
концен
трацию анализируемого вещества (кратности разбавления), но
без добавления
водорослей.
При ме ча ни е - При тестировании окрашенных или мутных проб можетвозникнуть мешающее влия
ние. обусловленное ослаблением светового потока, необходимого для роста клеток водорослей в анализируе
мой пробе. В таком случае измеряют интенсивность флуоресценции пробы без водорослей (фоновые раство
ры) и полученное
значение
вьччитают из значения интенсивности флуоресценции, полученного при измерении
лробьг с
водорослями.
Д. В 2.1.3 Приготовчюние контрольной пробы
Приготовление контрольной пробы проводят--
для метода A no 5.4.3.2;
- для метода Б аналогично 5.4.3.2, но с использованием питательной среды по А.2 (приложениеА).
Д.В.2.2 Подготовка прибора к измерениям
Прибор готовят к работе в соответствии сруководством (инструкцией) по эксплуатации.
Устанавливают следующие параметры работы прибора:
- температура 20°С (при наличии термостатирования):
- область длин волн для
возбуждения
флуоресценции 400 - 500 нм: область длин волн для регистрации
интенсивности флуоресценции 650 - 750нм.
Д.В.2.3 Г
р
адуировка прибора
Градуировку прибора выполняют с использованием средств программного обеспечения прибора (или с ис
пользованием компьютерных систем обработки данных) с применением градуировочныхрастворов по Д.В.2.4.
При этом коэффициент линейной корреляции полученных градуировочных характеристик
должен быть
не
менее 0.99.
Д.В.2.4 Приготовление градуировочных растворов
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
ГoadyupoeoiHbieрастворы готовят следующим способом: подготовленную культуру
водорослей
(см. при
ложение Д А) вносят в колбы вместимостью 250
саг
и разбавляют питательной средой,
приготовленной в
соответствии с требованиями приложения А (для метода А - среда Гэльдберга по А. 1. для метода Б - пита
тельная среда noА.2) в соотношении:
- 50см3суспензии водорослей и 50
саг
питательной
средьг
(разбавление в двараза):
- 25см3суспензии водорослей и 75
саг
питательной
средьг
(разбавление в четыре раза):
- 16.6см3суспензии водорослей и 83.4 см3питательной среды
(разбавление в
шесть раз): -
12.5
саг
суспензии водорослей и 87.5 см3питательной среды
(разбавление в восемь
раз); -
10 см3суспензии водорослей и 90
саг
питательной среды (разбавление в 10раз):
- 5
саг
суспензии
водорослей и 95 см3питательной среды (разбавление в 20 раз):
- 2.5
саг
суспензии
водорослей и 97.5 см3питательной среды (разбавление в 40 раз):
- 1.66
см
3
суспензии водорослей и 98.34 см3питательной среды (разбавление в 60 раз): -
1.25 см3суспензии водорослей и 98.75
саг
3
питательной среды (разбавление в 80 раз): -
1.0
саг
суспензии
водорослей и
99
саг
питательной среды (разбавление в 100раз),
-0.1
саг
суспензии
водорослей и 99.9
саг
питательной
средьг
(разбавление в 1000раз).
Д.В.2.5 Установление градуировочной характеристики
Колбы с подготовленными по Д.В.2.3 градуировочными растворами закрывают ватно-марлевыми проб
ками. встряхивают, помещают в люминостат или климатостат и выдерживают 15 мин при температуре
(20 ± 2)°С и освещенности 3000 - 6000 лк (для метода А) или (23 ± 2) °С и освещенности 6000-70000 лк (для
метода Б), после чего содержимое каждой колбы (включая холостую
пробу)
тщательно перемешивают.
28