ГОСТ 31931—2012
5.4.6 Приготовление спиртового раствора эозина массовой долей 1 %
1 г спирторастворимого эозина растворяют в 100 см3этилового спирта объемной долей 70 %.
5.4.7 Приготовление водного раствора метиленового синего с бурой
2г буры и 1г метиленовогосинего растворяют в 100 см3подогретой дистиллированной воды. Рас
твору дают один раз вскипеть и оставляют на длительное время (месяц и больше) для созревания.
5.4.8 Приготовление смеси для окрашивания срезов
Смесьсоставляют из трех растворов: раствор 1 — спиртовойраствор метиленовогосинего массо
вой долей 1 % (см. 5.4.5); раствор 2 — спиртовой раствор эозина массовой долей 1 % (см. 5.4.6); рас
твор 3 — водный раствор метиленового синего с бурой по (см. 5.4.7).
Смешиваютравные объемырастворов
1
и 2(по 10—15капелькаждого) и5— 10 капельраствора 3и
добавляют дистиллированную воду в двукратном отношении к общему объему трех растворов.
Смесь готовят непосредственно перед употреблением.
5.4.9 Подготовка проб к анализу
5.4.9.1 Из отобранных по 5.3 проб вырезают вторичные точечные пробы мышечной ткани пло
щадью не менее 1см2на всю глубину мышцы, почки илегких. Места взятия проб предварительно обра
батывают 96 %-ным этиловым спиртом. Точечные пробы вырезают из мест, наиболее быстро
подвергающихся порче, в частности, при анализе тушек птицы:
- из внутренних брюшных мест мышц;
- мышц в области шейного зареза:
- почек и легких при наличии их в тушках;
- любых других участков тушки, сомнительных по свежести.
5.4.9.2 К каждой пробе со стороны, противоположной наружной поверхности, прикрепляют с
помощью иголки иниткиэтикеткуизплотной белойбумаги, на которой графитным карандашом указыва
ютномер пробыи датуеевзятия. Пробы помещаютвместесэтикеткамив колбу, заливают 10%-нымрас
твором формалина, взятым в десятикратном объеме и плотно укупоривают.
5.4.10 Приготовление гистологических препаратов
5.4.10.1 Колбу с пробами, залитыми десятикратным объемом 10 %-ного раствора формалина
(см. 5.4.3) подогревают в вытяжном шкафудо появления пузырьков воздуха. Содержимоеслегка встря
хивают и вновь подогреваютдо появления пузырьков. Эту операцию повторяют три раза.
5.4.10.2 Формалинсливают, в колбувставляютстеклянную воронку ипромываютпробыхолодной
проточной водой в течение 5—7 мин.
5.4.10.3 Промытые пробы помещают на столик замораживающего микротома и ориентируют его
так. чтобы в срез попадали все слои пробы по глубине, а мышечные волокна посвоейдлине располага
лись параллельнолезвию ножа. Срезы готовяттолщиной 15—30 мкм. Почки илегкие ориентируюттолfa-
ко по глубине.
5.4.10.4 Срезы осторожно снимают кисточкой слезвия ножа ипомещают вчашку Петри сдистил
лированной водой на несколько секунддля распрямления. Под неповрежденные срезы подводят пред
метное стекло, предварительно покрытое смесью яичный белок — глицерин (см. 5.4.2). поочередно
извлекают срезы из воды с помощью препаровальной иглы и расправляют их на предметном стекле.
Выровненные срезы аккуратно накрывают сложенной в три слоя фильтровальной бумагой и, нажимая
пальцами, приклеивают их к предметному стеклу.
Предметные стекла со срезами помещают в чашку Петри.
С микротомного ножа с помощью тонкой кисточки срезы переносят на охлажденное в криостате
предметное стекло. Под стекло в области среза подводят палец, подогревают стекло, расплавляют и
приклеиваютсрез. При работесзамораживающимстоликом срезпереносятвчашку Потри наводу. Срез
после расправления извлекают из воды на середину стекла, удерживая его в верхней части препаро
вальной иглой. Затем срез накрываютсухойфильтровальнойбумагойи, легкоприжимая бумагу ребром
ладони, наклеиваютего на предметноестекло. Послетогокакфильтровальную бумагуубирают, срез не
должен быть поврежденным.
5.4.10.5 Наклеенные срезы окрашивают смесью по 5.4.8. Красящую смесь набирают в пипетку и
наносят ровнымслоем насрезы, находящиеся на предметномстекле. Через20—30мин срезы промыва
ют дистиллированной водой из пипетки.
Длядифференцирования срезы обрабатывают водой, подкисленной уксусной кислотой (1—2кап
ли кислоты на 100 см3 воды) в течение 1мин. послечего их промываютдистиллированной водой в тече
ние 5— 10 мин.
5