ГОСТ 31709—2012
8.3 Иммуноаффинмая очистка
Иммуноаффинной колонке (см. 6.13) дают достигнуть комнатной температуры. Присоединяют
шприц к верхней части иммуноаффинного картриджа. Отбирают 100 см3 приготовленного испытуемого
раствора (см. 8.1 или 8.2). используя мерный цилиндр вместимостью 100 см3(см. 6.5) или пипетку.
Переводятанализируемую пробув шприц ипропускаютчерез иммуноаффинную колонку спосто
янной медленной скоростью потока около 2—3 см3/мин. Используют гравитационную или вакуумную
систему (см. 6.17)для контроля скорости потока. Неследуетдопускатьвысыхания колонки. Промывают
колонку, используя 40 см3воды при постоянной медленной скорости потока. После промывки колонку
продувают досуха, промывочный раствор выбрасывают.
Устанавливают другой сухой чистый шприц на картридж. Медленно элюируют афлатоксин М, из
колонки, пропуская2.5см3смесиацетонитрил/метанол (см. 5.2)и затем2.5см3чистогометанола (5.1.4).
Даютэтим растворам контактироватьс колонкой не менее 1мин присоблюдении постоянной медленной
скорости потока. Затем продувают колонку досуха.
Собирают элюат в пробиркусконическим дном и выпаривают до минимального объема (1—2кап
ли). используяроторныйиспаритель(см. 6.8)при температуре £40 "С или используяслабый потоказота.
Не следует испарятьэлюатдо полной сухости, это позволитдостичь хорошего повторного суспендиро
вания афлатоксина М,, присутствующего в остатке пробы.
Добавляют200мм3чистого ацетонитрила(см. 5.1.2) «остаткупробы. Закрываютпробиркуиинтен
сивно перемешивают, используя мешалкувихревого типа (см. 6.16), в течение 1мин. Испаряютснова do
минимального объема (1—2 капли), используя роторный испаритель (см. 6.8) при температуре £40 аС
или слабый поток азота.
П р и м е ч а н и е — Предыдущий этап необходим, чтобы избежать образования эмульсии и получить хоро
шее повторное суспендирование при добавлении смеси толуол/ацетонитрил.
Открывают пробирку и добавляют 100 мм3 смеси толуол/ацетонитрил (см. 5.3) к остатку пробы.
Закрываютпробиркуисноваинтенсивноперемешивают, используямешалкувихревоготипа (см. 5.16). в
течение 1 мин. Очищенную таким образом пробу для анализа хранят до начала процедуры.
9 Проведение определения
9.1 Однонаправленная тонкослойная хроматография
На пластинку тонкослойной хроматографии (см. 6.20) наносят 10—20 мм3очищенной пробы
по8.3. Добавляюталиквоты, например, по5,10.20 мм3соответствующегорабочегостандартногорас
твора афлатоксина М,. приготовленного по 5.5.2 (раствор А или В).
Пластинкупомещают в камеру длятонкослойной хроматографии (см. 6.19), содержащую рас
твордля однонаправленнойтонкослойной хроматографии (см. 5.4.1). Хроматографиюпроводятдо тех
пор. пока фронт растворителя не достигнет высоты примерно 10 см.
Удаляют пластинку из камеры и оставляют ее сохнуть на воздухе. Считывают полученные пятна,
используя ультрафиолетовую лампу (см. 6.21) или денситометр (см. 6.22) при 365 нм. Сравнивают
интенсивностьфлуоресценциипятна нахроматограммепробыс интенсивностями, полученнымидля
рабочих стандартных растворов афлатоксина М..
Вычисляют содержание афлатоксина М, в анализируемой пробе, как описано в разделе 10.
Если интенсивностьфлуоресценциипятнанахроматограммепробы вышепосравнению срабо
чим стандартным раствором афлатоксина М, самой высокой интенсивности флуоресценции, тооце
нивают уровень загрязнений. Исходя из этого уровня, разбавляют очищенную пробу для анализа
(см. 8.3) подходящим объемом смеси толуол/ацетонитрил (см. 5.3).
Повторяют процедуру с разбавленной очищенной пробой, описанную в настоящем подразделе.
9.2 Двунаправленная тонкослойная хроматография
При появлении на хроматограмме помех вблизи флуоресцирующих пятен проводятдвунаправ
ленную тонкослойную хроматографию. Наносят на пластинку для тонкослойной хроматографии
(см. 6.20)20 мм3очищеннойпробыдляанализа (см. 8.3). Добавляют по5.10.20 мм3рабочего стандарт
ного раствора афлатоксина М,, приготовленного, какописано в 5.5.2, чтобы пропуститьего в направле
нии 1, и по 5,10,20 мм3 того же самого рабочего стандартного раствора афлатоксина М, (см. 5.5.2),
чтобы пропустить его в направлении 2 (см. рисунок 1).
Помещают пластинку в камеру тонкослойной хроматографии (см. 6.19), содержащую раствор
для однонаправленной тонкослойной хроматографии (см. 5.4.1). Хроматографируют (элюируют)
пластинку в первом направлениидо тех пор, пока фронт подвижной фазы недостигнетвысотыпример
но 7 см. Удаляют пластинку из камеры и оставляют ее сохнуть на воздухе.
5