ГОСТ Р 53913—2010
ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стан
дарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (из
мененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него,
применяется а части, не затрагивающей эту ссылку._______________________________________________________
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р ИСО 7218. а также следующий термин с
соответствующим определением.
3.1 escherichia coli 0157 (Е. coli 0157): Микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на
поверхности засеваемой в чашке среды, а также индол, и специфическим образом агглютинируют с ан
тисывороткой к антигену 0157.
П р и м е ч а н и я :
1 Сорбит-положительные штаммы Е. coli 0157 не обнаружены в среде CT-SMAC (5.2).
2 Обнаружены некоторые индол-отрицательные мутации.
4 Сущность метода
Обнаружение Escherichia coli 0157 связано с обязательным использованием четырех последова
тельных стадий в соответствии с приложением А:
- обогащение пробы для анализа, гомогенизированной в модифицированном триптон-соевом
бульоне, содержащем новобиоцин (mTSB ♦ N). с инкубацией при температуре (41.5 ± 1) °С в течение 6 ч, а
затем еще в течение 12—18 ч;
- сепарация и концентрация микроорганизмов с помощью иммуномагнитных частиц, связанных с
антителами к бактерии Е. coli 0157;
- выделение путем пересева иммуномагнитныхчастиц с налипшими бактериями на агаровую сре
ду Мак-Конки, в которую добавляют сорбит и суплемент СТ (цефиксим и теллурит калия) (CT-SMAC), и
на выбранную заказчиком вторую селективную агаровую среду для выделения;
- подтверждение идентификации сорбит-негативныхколоний насреде CT-SMAC и колоний типич
ныхдля Е. coli 0157 на второй агаровой средедля выделения в результате образования индола иагглю
тинации с антисывороткой к Е. coli 0157.
П р и м е ч а н и е — Определение других характеристик положительных штаммов, например, с помощью
патогенных маркеров, возможно после их передачи а соответствующую референтную лабораторию.
5 Питательные среды, реактивы и антисыворотки
Общие правила микробиологических исследований — ло ГОСТ Р ИСО 7218.
5.1 Обогатительная среда (модифицированный триптон-соевый бульон с новобиоцином
(mTSB + N)
Состав;
Ферментативный перевар казеина................................17,0 г.
Ферментативный перевар сои.........................................3,0 г.
0(+>-глюкоза......................................................................2,5 г.
Желчные соли No. 3 .........................................................1,5 г.
Хлорид натрия...................................................................5.0 г.
Моногидрофосфат калия (К2НР04) ................................4,0 г.
Дистиллированная вода.................................................. 1 000 см3
5.1.1 Приготовление сроды
Растворяют компоненты или готовую дегидратированную питательную среду в воде, принеобходи
мости подогревают. Устанавливают уровень pH, используя pH-метр (см. 6.6), если необходимо, так, что бы
после стерилизации он соответствовал pH (7,4 ± 0.2) при температуре 25 вС.
Разливают среду в соответствующих количествах в колбы или склянки (6.7).
Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве (см. 6.1) при температуре 121 °С.
5.1.1.1 Раствор новобиоцина
Состав:
Новобиоцин.........................................................................0,45 г.
Дистиллированная вода...................................................100 см3
2