ГОСТ Р 53913—2010
6.13 Пробирки полипропиленовыетипа Эппендорф. с навинчивающимся колпачком, стерильные,
одноразовые, центрифужные, вместимостью 1,5 см3, подходящие для магнитного штатива.
Следует избегать образования аэрозолей при открытии.
6.14 Роторный смеситель (работающий в режиме авторотации, смеситель проб крови), вращаю
щийся со скоростью от 15 до 20 об/мин.
6.15 Чашки Петри, диаметром 90 и 140 мм.
6.16 Смеситель типа Вортекс.
7 Отбор проб
Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТР 53430. ГОСТ 26668. Рекомендуетсяперед хра
нением пробу быстро остудить.
В лабораторию направляют представительнуюпробу, которая недолжна быть повреждена или
изменена в процессе транспортирования и хранения.
8 Подготовка проб
Подготовку проб проводят в соответствии с ГОСТ Р 51426, ГОСТ Р 51448. ГОСТ Р 53430,
ГОСТ 26669.
9 Методика проведения испытания по схеме, приведенной
в приложении А
9.1 Проба для анализа и исходная суспензия
Для приготовления исходной суспензии пробу для анализа (г или см3) добавляют к модифициро
ванномутриптон-соевому бульонус новобиоцином (mTSB + N) объемом 9 см3или массой 9 г. предвари
тельно нагретого в инкубаторедо температуры41,5 еС, чтобы пробадля анализа была в соотношении с
mTSB + N как 1/10 (масса к объему или объем к объему).
Рекомендуется использовать пакеты Стомахер с сетчатыми вставками для снижения интерфе
ренции пищевых частиц с набором реактивов для иммунозахвата (см. 9.3).
9.2 Обогащение
Инкубируют (см. 6.4) исходную суспензию, приготовленную в соответствии с 9.1, при температуре
41,5 °С в течение 6 ч, а затем еще в течение 12—18 ч (фактическая продолжительность от 18до 24 ч).
6-часовая инкубация, за которой следуют иммуномагнитная сепарация и посев на чашки с селек
тивным агаром, может дать положительный результат обнаружения презумптивных бактерий, который
может стать отрицательным после дальнейшей 18-часовой инкубации.
9.3 Иммуномагнитная сепарация
9.3.1 Общие требования
Иммуномагнитиую сепарацию следует проводить спустя 6 ч после инкубации и еще раз, если не
обходимо. после 12—18 ч инкубации.
Для иммунозахвата необходимо следовать инструкциям изготовителя в отношении методики и
метода применения набора реактивов и оборудования.
9.3.2 Иммунозахват
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! — Используют только асептические методы, чтобы избежать любого
внешнего загрязнения иобразования аэрозолей. Выполняют эту процедуру в защищенной от за
грязнений камере, если имеется. Работают в порчатках.
Используя магнитный сепаратор (см. 6.12) и иммуномагнитные частицы, связанные с антителами
к Е. coJi 0157, выполняют следующую процедуру захвата/селарации.
Смешивают обогатительную культуру (см. 9.2) и оставляютдля осаждения всех крупных пищевых
частиц. В полипропиленовую пробирку типа Эппендорф (см. 6.13) добавляют 20 мкл подготовленных
иммуномагнитных частиц (5.7) при комнатной температуре. Отделяют 1см3верхнего слоя жидкости от
обогатительной культуры, стараясь, по возможности, избегать попадания любых пищевых частиц или
жировых включений, и переносят в полипропиленовую пробирку типа Эппендорф.
6