ГОСТ Р 53913—2010
Перемешивают суспензию в роторном смесителе (см. 6.14) со скоростью вращения приблизитель
но от 12 до 20 мин*1в течение 10 мин.
9.3.3 Сепарация
Устанавливают каждую полипропиленовую пробиркутипа Эппендорф (см. 9.3.2) в магнитный шта
тив (см. 6.12) и дают магнитным частицам скопиться около магнита, слегка покачивая штатив на 180’.
Осторожно открывают колпачок, стараясь не задетьчастицы настенке пробирки. Используя каждый раз
новую стерильную пипетку Пастера (см. 6.10) для каждой пробы, с пробиркой в магнитном штативе, уда
ляют жидкость, медленно отсасывая ее со дна пробирки. Добавляют 1см3стерильного промывочного
буфера (см. 5.8) и закрывают колпачком. Удаляют магнит из штатива. Перемешивают содержимое про
бирок. осторожно поворачивая штатив на 180°, и затем возвращают магнит на штатив.
Следует соблюдать осторожность, чтобы избежать перекрестного загрязнения при добавлении
свежего буфера.
Продолжают процедуру, какописано выше, чтобы удалить промывочнуюжидкость новой пипеткой
Пастера для каждой пробы. Повторяют процедуру промывки несколько раз.
Вынимают из магнитного сепаратора, добавляют 100 мкл стерильного промывочного буфера в
пробирку и ресуспендируют магнитные частицы.
П р и м е ч а н и е — Эту процедуру трудно применять к жирным продуктам или свежим сырам
9.4 Посев на чашки с селективным агаром и идентификация колоний Е. coli 0157
9.4.1 Посев на чашки
С помощью механического пипеттора (см. 6.11) переносят 50 мкл промытых и ресуспендирован-
ных магнитных частиц на предварительно высушенную чашку с агаровой сродой Мак-Конки с сорбитом
и суплементом СТ (цефиксим и теллурит калия) (см. 5.2). а также 50 мкл на предварительно высушен
ную чашку с второй селективной средой для выделения микроорганизмов (см. 5.3).
Делают посев частиц штрихом, используя стерильную петлю (см. 6.10), для получения множества
хорошо изолированных колоний на поверхности агара.
Инкубируют в термостате CT-SMAC при температуре 37 ’С в течение 18—24 ч. а также инкубиру
ют вторую селективную среду для выделения при тех же температуре и времени.
В зависимости от типа пищевой пробы иее микробиологической флоры инкубация обогатительно
го бульона в течение 20—24 ч может привести к бурному росту других бактерий на чашках с селектив
ным агаром, что затруднит обнаружение колоний Е. coli 0157. Инокуляция селективных агаров с
разведениями препаратовдля иммуномагнитной сепарации или объемами меньше 50 мкл на чашку мо
жет увеличить шанс получения изолированных колоний Е. coli 0157 и предел обнаружения.
9.4.2 Идентификация типичных колоний Е. coli 0157
На агаре Мак-Конки типичные колонии бывают прозрачными и почти бесцветными с бледными
желтовато-коричневыми проявлениями и диаметром приблизительно 1 мм.
Исследуют вторую селективную агаровую среду для выделения типичных колоний Е. coli 0157,
следуя инструкциям изготовителя.
9.5 Подтверждение идентификации
Можно использовать имеющиеся в продаже миниатюрные биохимические наборы для идентифи
кации сорбит-отрицательных и индол-положительных бактерий Е. coli и наборов для идентификации Е.
coli 0157 методом латекс-агглютинации при условии, что для подтверждения проводятся соответ
ствующие тесты с известными положительными и отрицательными штаммами.
9.5.1 Отбор колоний
Скаждой чашки отбирают пять типичных колоний, какуказано в 9.4. Если чашка сагаром содержит
менее 5 типичных колоний, необходимо исследовать все колонии.
Засевают штрихом каждую выбранную колонию на чашку с питательным агаром (см. 5.4). чтобы
дать возможность разрастись хорошо выделенным колониям.
Инкубируют (см. 6.3) чашки в течение 18—24 ч при температуре 37 °С.
Для тестов используют только чистые культуры из чашки с питательным агаром, как описано
в 9.5.2 и 9.5.3.
9.5.2 Биохимическая идентификация (образование индола)
Инокулируют одну колонию из чистой культуры на питательный агар (см. 9.5.1) в пробирку с трип-
тон/триптофановой средой (см. 5.5).
Инкубируют (см. 6.3) при температуре 37 °С в течение 24 ч.
7