ГОСТ Р 53974—2010
и слабокислой зонах pH. для создания необходимого pH ИС раствор гемоглобина готовят на буфере с
более низким значением pH всоответствии стаблицей 1.
Т а б л и ц а 1
pH буфера
pH субсграта <ИС)
2.0
3.0
4.7
5.3
7.0
7.0
9.3
9.0
Раствор гемоглобина хранят в закрытой стеклянной посуде при 20 °Св течение трехдней.
4.3.3 Приготовление раствора с (Na2C03) = 0,5 моль/дм3
Навеску безводного углекислого натрия массой (53.00 ± 0.01) г растворяют в 500 см3дистиллиро
ваннойводы в мернойколбевместимостью 1 дм3.Объемдоводятдо метки дистиллированной водой при
20 X и перемешивают. Раствор углекислого натрия хранят в закрытой стеклянной посуде при 20 °С в
течениедвух недель.
4.3.4 Приготовление растворатрихлоруксусной кислоты с массовой долей 5%
НавескуТХУ массой (50.00 i 0.01) г растворяют в 500 см3дистиллированной воды в мерной колбе
вместимостью 1 дм3.Объемдоводятдо метки дистиллированной водой при20°С иперемешивают. Рас
твор ТХУ хранят в закрытой стеклянной посуде при 20 X в течениечетырех недель.
4.3.5 Приготовление реактива Фолина
4.3.5.1 Приготовление основного раствора реактива Фолина
Для приготовления основного раствора реактива Фолина в круглодонную колбу с пришлифован
ным обратным холодильником вместимостью 1 дм3 наливают 600 см3дистиллированной воды, добав
ляют (100.00
i
0.01) г вольфрамовокислого натрия и(25,00 ±0.01) г молибденовокислого натрия. Затем
приливают 50 см3ортофосфорной кислоты с массовой долей 85 % и 100 см3концентрированной соля
ной кислоты иосторожно перемешивают. Смесь кипятят на слабом огне на асбестовой сетке в течение
10 ч. Кипячениедопускается прерывать.
По окончании кипячения в охлажденную смесь добавляют (150.00 1 0,01) г сернокислого лития,
50 см3дистиллированной водыи пятькапельброма. Открытую колбу кипятят наслабом огне подтягой в
течение 15—20мин, чтобы удалить избытокпаровброма. Раствордолжен иметьжелтуюокраску. После
охлаждения раствордоводят дистиллированной водой до 1дм3(при необходимости фильтруют через
трубкуАллина, заполненную стеклянной ватой).
Приготовленный основной раствор реактива Фолина хранят в склянке из темного стекла в холо
дильнике. Через2—3 месхраненияследуетдобавить внегоодну-две каплибромаисновапрокипятитьв
течение 15—20 мин. Показателем непригодности раствора считается его помутнение и изменение
окраски из желтой в зеленую.
Концентрацию реактива Фолина проверяют титрованием разбавленного 1:10 реактива Фолина
раствором гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм3по фенолфталеину. Реактив Фолина должен
быть концентрации 2.0моль/дм3покислоте. ЕсликислотностьреактиваФолинабольше2.0моль/дм3,то
его разбавляют дистиллированной водой, если меньше — реактив для работы не пригоден. Раствор
реактива Фолина хранят в закрытой стеклянной посуде при температуре 20 X в течение одной недели.
4.3.5.2 Приготовление рабочего раствора реактива Фолина
Рабочий раствор реактива Фолина готовят разведением основного раствора дистиллированной
водой в соотношении 1:2 (одна часть реактива Фолина идее части дистиллированной воды). Рабочий
раствор реактива Фолина хранят в закрытой стеклянной посуде при температуре 20 X в течение одной
недели.
4.3.6 Вычисление тирозинового эквивалента
Протеолитическую активность исследуемого образца вычисляют по тирозину. Для этого строят
градуировочный графикзависимостиоптической плотности от концентрации тирозина и по немувычис
ляюттирозиновый эквивалент (ТЭ). т.е. оптическую плотность, которую дает 1мкмоль тирозина в 1см3
градуировочного раствора.
5