ГОСТ Р 53974—2010
- тирозин, содержаниеосновного вещества 98 %;
- трихлоруксусную кислоту;
- кислотусоляную по ГОСТ 3118;
- кислотуортофосфорную по ГОСТ 10678;
- кислотууксусную по ГОСТ61;
- кислотуборную по ГОСТ 9656;
- карбамид по ГОСТ 6691;
- натрий углекислый по ГОСТ 83;
- натрия гидроокись по ГОСТ4328;
- натрий уксуснокислый по ГОСТ 199;
- натрий вольфрамовокислый 2-водный по ГОСТ 18289.
- натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931;
- литий сернокислый;
- бром по ГОСТ4109;
- водудистиллированную по ГОСТ 6709.
4.2.2 Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2 (х.ч.) или 3 (чщ.а.) по ГОСТ 13867,
кромеТХУ, которая используется марки ч.
4.2.3 Допускается использованиедругих средств измерения иаппаратуры, которыепометрологи
ческим характеристикам соответствуют указанным в 4.2.1. а также инойлабораторной посуды и реакти
вов. в том числе и импортного производства, которые аналогичны указанным в4.2.2.
4.3 Подготовка канализу
4.3.1 Приготовление универсального буферного раствора молярной концентрации
0,1 моль/дм3
4.3.1.1 Приготовление раствора с (СН3СООН) =0.1 моль/дм3 (растворА)
5,7 см3ледяной уксусной кислоты растворяютдистиллированной водой при 20 °С в мерной колбе
вместимостью 1дм3.Растворуксуснойкислоты хранятвзакрытойстекляннойпосудепри 20°Свтечение
четырех недель.
4.3.1.2 Приготовление раствора с (Н3Р04) =0.1 моль/дм3(раствор В)
6.45 см3ортофосфорной кислоты растворяютдистиллированной водой при20 ’С в мерной колбе
вместимостью 1 дм3.Растворортофосфорнойкислоты хранятв закрытойстекляннойпосудепри 20еС в
течение четырех недель.
4.3.1.3 Приготовление раствора с (Н3ВОэ) =0,1 моль/дм3 (раствор С)
Ортоборную кислотумассой (6.18±0.02) грастворяютдистиллированной водой при 20 °Св мерной
колбевместимостью 1 дм3.Растворортоборной кислоты хранятв закрытойстеклянной посудепри 20 °С в
течение четырехнедель.
4.3.1.4 Приготовление раствора с (NaOH) = 1,0 моль/дм3
Гидроокисьнатрия массой (40.00±0,01) г растворяютдистиллированнойводой при 20 °Св мерной
колбевместимостью 1 дм3.Раствор гидроокиси натрияхранят в закрытой стеклянной посудепри 20 °С в
течение двух недель.
4.3.1.5 Приготовлениеуниверсального буферного раствора
При смешиванииравных объемов растворовА. В иСполучают универсальныйбуферный раствор с
pH (2.010,2). который используют для приготовлениясубстрата приопределенииферментативнойактив
ности кислых протеаз; для слабокислыхпротеаз — к 100 см3универсальногобуферного растворадобав
ляют6,0см3растворагидроокиси натрия молярной концентрации 1моль/дм3,получаябуферный раствор
с pH4.7; длянейтральныхпротеаз — к100см3универсальногобуферногорастворадобавляют 10см3гид
роокиси натрия, получая буферный растворс pH 7,0;для щелочных протеаз — к 100 см3 универсального
буферного растворадобавляют 14 см3гидроокиси натрия, получая буферный растворс pH 9.3.
Буферные растворы хранят в закрытой стеклянной посуде при 4 °Св течениечетырех недель.
4.3.2 Приготовление раствора гемоглобина с массовой долей 2,0 % (субстрат)
Небольшое количество гемоглобина предварительно растирают в фарфоровой ступке. Навеску
растертого гемоглобина массой (2.00 ± 0.01) г количественно переносят в стаканчик вместимостью
100 см3ирастворяютв 50 см3буферного раствора с соответствующим значением pH по4.3.1.5 (дляэто
гонавеску гемоглобинатщательнорастираютв фарфоровой ступкев небольшом количестве необходи
мого буфера, затем добавляют остальное его количество). После этого для получения инкубационной
смеси (ИС) к раствору гемоглобинадобавляют (32,0 ±0.1) гмочевины, количественно переносят в мер
ную колбувместимостью 100 см3,доводятобъем ИС тем жебуферомдо метки ивыдерживают втечение
1ч при 30 °С дляденатурации белка. Так как мочевина сдвигаетзначение pH буфора. особенно в кислой
4