ГОСТ Р 53992—2010
10,0 по 10.5 мин — переход к элюированию в фазе А1Б по объему (80/20). с 10.5 по 15.0 мин — уравно
вешивание колонки в фазе А/Б по объему (80/20).
6.6.2 Для настройки масс-спектрометрического детектора применяют следующие параметры:
- температура источника — 120 еС:
- температура газа десольвации — 450 °С;
- скорость потока газа десольвации — 650 дм3/ч;
- скорость потока вспомогательного газа — 80 дм3/ч.
6.7 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.7.1 Мойку и сушку посуды следует проводить в отдельном помещении, оборудованном приточ
но-вытяжной вентиляцией. Не допускается проведение подготовки посуды в данном помещении для
других видов анализов. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо
исполь зовать отдельные сушильные шкафы.
6.7.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с
последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (одно
кратно). ацетоном (дважды).
6.7.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шка
фу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку
посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С
до 110 °С.
7 Порядок выполнения измерений
7.1 Обработка проб органов, тканой животных и креветок
7.1.1 Мышечную ткань предварительно очищаютот грубой соединительной ткани игрубого хити
нового покрова. 100 г мышечной ткани измельчают на гомогенизаторе и взвешивают по 1.0 г гомогени
зированной ткани в полипропиленовой виале вместимостью 50 см3.
7.1.2 Удаление несвязанных метаболитов*
В виалу с гомогенизированнойтканью (см. 7.1.1) добавляют 1см3деионизированной воды и 4 см3
охлажденного метанола, тщательно встряхивают и помещают на предварительно охлажденную до
4 5С центрифугу и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин. После центрифугирования
уда ляют органический слой. Образец вновь промывают трижды, добавляя каждый раз по 4 см3
охлажден-ного метанола и удаляя органический слой. Затем процедуру экстракции и
центрифугирования повторяют: дважды с добавлением 4 см3 охлажденного этилового спирта и
дважды с добавлением 4 см3 охлажденного серного эфира, также удаляя органические слои.
Объединенные экстракты собирают в чистую виалу.
7.1.3 Для гидролиза и дериватизации в виалу с гомогенизированной тканью по7.1.1 или в виалус
экстрактом по 7.1.2 добавляют 50 мм3 раствора внутреннего стандарта (см. 6.4.5), тщательно встряхи
вают и оставляют на 15 мин. Добавляют 5 см3 соляной кислоты (см. 6.3.1) и 75 мм3раствора НБА в
метаноле (см. 6.3.4). Виалу закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в тече
ние 10 мин , затем помещают на нагревательный модуль при температуре 37 °С на 16 ч.
7.1.4 Для нейтрализации по истечении 16 ч виалу с образцом снимаютс нагревательного модуля
и охлаждают до комнатной температуры. После охлаждения добавляют 0.5 см3раствора натрия фос
форнокислого додекагидрата по 6.3.5 и тщательно перемешивают. Доводят pH до значения 7.0 при
помощи раствора гидроокиси натрия (см. 6.3.3). Вновь тщательно перемешивают и оставляют на
5 мин. Значение pH проверяют по индикаторной бумаге и. при необходимости, доводят до нужного
значения.
7.1.5 Для экстракции нитрофенильиых производных к нейтрализованному образцу добавляют
4 см3этилацетата и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 10 мин. Затем помещают
на предварительно охлажденную до 4 °С центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение
15 мин. Органический слой количественно переносят в круглодонную колбу. Данную процедуру повто
ряют два раза. Объединенные экстракты упаривают на ротационном испарителе при температуре от
40 °С до 45 °С.
•При определении связанных (образующих комплексы с белками) метаболитов, до процедуры гидролиза и
дереаатизации. необходима предварительная отмывка образцов от несвязанных (находящихся в свободном со
стоянии) метаболитов. При определении общих метаболитов предварительную процедуруотмывки не используют.
8