ГОСТ Р 53992—2010
6.5 Построение градуировочной характеристики
6.5.1 Градуировочную характеристикустроят при помощи матричной градуировки. Для этого про
водят обработку «чистых» проб, приготовленных и проанализированных ранее, не содержащих мета
болитов нитрофуранов в соответствии с требованиями раздела 7, в зависимости от типа исследуемой
матрицы. На стадии перерастворения перед введением в хроматограф в мерную пробирку вмести
мостью 5 см3добавляют нитрофенильную смесь метаболитов (см. 6.4.3)с таким расчетом, чтобы окон
чательные массовые концентрации находились в пределах от 0.1 до 500 нг/см3. Затем добавляют 50
мм3смеси нитрофенильных дейтерироеанных производных (см. 6.4.7) и необходимое количество
растворителя (см. 6.3.8). доводя объем до 1 см3.
6.5.2 Для получения градуировочных данных используют не менее трех уровней концентраций
матричных градуировочных растворов. Определяемые в анализируемом образце массовые концен
трации метаболитов нитрофуранов должны находиться в диапазоне концентраций градуировочной
характеристики.
6.5.3 При градуировке хроматографа анализируют матричные градуировочные растворы раз
личных уровней концентраций в условиях, приведенных в6.2.6.6. Затем, используя программноеобес
печение для сбора и обработки хроматографических данных, для метаболитов нитрофуранов
устанавливают градуировочные характеристики в виде зависимостей отношения площадей хромато
графических пиков соответствующего соединения к площади пика внутреннего стандарта от массовой
концентрации соединения в образце.
Построение графиков допускается проводить при помощи программы обработки данных
ВЭЖХ-МС/МС или при помощи программы Excel (Microsoft Office).
6.5.4 Вычисление площади пика проводят для каждого дочернего иона анализируемых соедине
ний. Допускается проведение количественных измерений по одному, наиболее интенсивному, дочер
нему иону. Для подтверждения наличия метаболитов нитрофуранов рассчитывают отношения
площади пика двух дочерних ионов для каждого соединения, которые должны соответствовать значе
ниям. указанным в таблице 1.
Т а б л и ц а 1— Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях электроспрея с регистрацией поло
жительных ионов
Метаболиты нитрофуранов
Ион предшественник. т)г
Дочерние ионы, т/г
2-НФ-АОЗ
236,2
134,0/104,1
2-НФ-с1< АОЗ
240.3
134.0/149.1
2-НФ-АМОЗ
335,2
291,1/262,1
с
2-НФ- 15 АМОЗ
340,3
296,2/265,2
2-НФ-АГД
249,2
134,0/104,1
2-НФ-(С13)3-АГД
251,9
133.9/179.1
2-НФ-СЕМ
209,2
191,9/166.0
2-НФ-1.2-N,s.C,3-CEM
212,2
168.0/195.2
6.5.5Расчетные концентрации для обоих фрагментных ионов каждого метаболита нитрофура
нов должны совпадать в пределах 20 %.
Градуировочная зависимость считается приемлемой, если рассчитанное значение квадрата
коэффициента корреляции для градуировочной кривой каждого фрагментного иона каждого метаболи та
нитрофуранов не менее 0.98.
6.6 Хроматографические условия измерений
6.6.1Хромато-масс-спектрометр включают и настраивают в соответствии с техническим руковод
ством по его эксплуатации и устанавливают следующие хроматографические параметры:
- скорость потока элюента — 300 мм3/мим;
- объем вводимой пробы — 10 мм3.
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление растворов элюеитов
согласно 6.3.7): в начальный момент — соотношение фазы А/Б по объему (80/20), с 0.0 по
8.0 мин — градиентное элюирование к 95 % фазы Б, с 8.0 по 10.0 мин — элюирование в 95 % фазы Б. с
7