ГОСТ Р 53594—2009
9.4.4 В лунки планшета механическим дозатором вносят 0.15 см3 раствора «ФК». заклеивают
пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в течение 1 ч при 37 °С иотмывают, как указано в9.4.3.
9.4.5 В лунки планшета вносят механическим дозатором 0.1 см3раствора Ne 11 из тест-системы
в соответствии с приложением А и инкубируют в течение 15 мин в темноте при температуре 37 °С.
Добавляют 0.1 см3раствора No 12 из тест-системы в соответствии с приложением А. аккуратно
переме шивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в вертикальный
фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм.
9.5 Обработка результатов определения
9.5.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность
значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10.
Рассчитывают связывание АТ (или относительное поглощение) П. %, по формуле
П = ^1к100.
оп0
где ОП,. — среднее значение ОП, измеренной влункахснулевым стандартом (No3 — КО — буфердля
экстракции из тест-системы в соответствии с приложением А);
ОП0— среднее значение ОП. измеренной в лунках с градуировочными растворами с известным
содержанием определяемого анаболика (№ 4 — No8 изтест-системы в соответствии с при
ложением А) или рабочими растворами экстрактов испытуемых образцов.
По значениям процентов связывания, вычисленным для градуировочных растворов и соответ
ствующим известным значениям содержания определяемого анаболика (нг/дм3), строят градуировоч
ный график в полулогарифмической системе координат.
9.5.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу.
На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций аналита в градуировочных растворах
(No 4 — No 8 из тест-системы в соответствии с приложением А). По оси ординат откладывают
значения процентов связывания, рассчитанные для этих концентраций по формуле (1). и через
пять точек проводят линию.
9.5.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для
рабочих растворов экстрактов испытуемых образцов, находятлогарифм массовой концентрации опре
деляемого в них соединения. С помощью микрокалькулятора вычисляют его обратное значение (анти
логарифм). соответствующее массовой концентрации определяемого анаболика в рабочем растворе
экстракта. После чего рассчитывают массовую концентрацию (содержание) анаболика в пробе С,
мкг/кг или мкг/дм3. по формуле
С * с-№1000.(
2
)
где с — массовая концентрация определяемого анаболика в рабочем раствореэкстракта испытуемо
го образца, определяемая по градуировочному графику, нг/дм3:
К — коэффициентпересчетамкг/дм3врастворе экстракта испытуемогообразца в мкг/дм3(мкг/кг) в
образце, учитывающий как разведение, так и степень извлечения анаболика (таблица 3),
1000 — коэффициент пересчета нг/дм3в мкг/дм3(мкг/кг).
Т а б л и ц а 3
Анаболик
Коэффициент пересчета
(К)
Мышечная
гинь
ПеченьГпаэ
ШерстьМочаКоры
Кленбутерол
10
1010
8010200
Meтилтестостерон
3
8—
—8—
19-Нортестостерон
20
16—
—20—
Тренболон
8
8
—
—8—
Этинилэстрадиол
16
16—
—16
—
Диэтилстильбестрол
20
16
—
—20200
Дексаметазон
16
16—
—1660
13