ГОСТ Р 53594—2009
ролизат охлаждаютдо (231 5) вС, добавляют 5 см3 смеси этилацетата и изопропанола, перемешивают
на приборедля встряхивания в течение 1мин и центрифугируют в течение 5 мин при 4000 мим*1.Верх
нюю органическую фазу переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 см3. Экстракцию повторяют с
тем же объемом смеси этилацетата и изопропанола. Органические фазы объединяют и упаривают
досуха на роторном испарителе при температуре 50 °С — 55 СС.
Срок хранения сухого остатка при температуре минус 20 °С — 1 мес.
8.4.5 Отобранный образец глаза, замороженный при температуре минус 20 °С. размораживают и
разрезают тонким скальпелем с двух сторон. Талую внутриглазную жидкость собирают в стакан. От
глаза отделяют сетчатку, объединяют с внутриглазной жидкостью и гомогенизируют. 1 г гомогената
прогревают в сушильном шкафу в течение 10 мин при температуре 80 °С. охлаждают до комнатной
температуры и центрифугируют в течение 10 мин при 4000 мин1.
Срок хранения супернатанта при температуре минус 20 °С — 1 мес.
1 см3 супернатанта переносят механическим дозатором во флакон типа фалькон, добавляют
1см3трис-буфера молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 и 1 см3 хлорной кислоты молярной концен
трацией 0.1 моль/дм3 и перемешивают. Центрифугируют в течение 20 мин при 4000 минСуперна
тант переносят в новый флакон, pH доводят до (9.8
1
0,2), добавляя по каплям гидроокись натрия
молярной концентрацией 1 моль/дм3 (1 н). Добавляют 2.5 см3 смеси этилацетата и изопропанола и
перемешивают на приборе для встряхивания в течение 1 мин. Центрифугируют в течение 10 мин при
4000 мин’1. Верхний слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 см3. Оставшийся нижний
слой экстрагируют еще два раза, добавляя по 1.5 см3 смеси этилацетата и изопропанола. Верхние
слои объединяют и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 50 °С — 55 °С.
Срок хранения сухого остатка при температуре минус 20 °С — 1 мес.
8.5 Подготовка проб для проведения анализа содержания анаболиков* в моче и печени
8.5.1 При определении содержания диэтилстильбестрола, метилтестостерона, 19-нортестосте-
рона. тренболона, этинилэстрадиола и дексаметазона осуществляют гидролиз мочи. Для этого мочу
центрифугируют в течение 10 мин при 3000 мин"1. Во флакон типа фалькон механическим дозатором
вносят 0,5 см3отцентрифугированной мочи, добавляют 3 см3ацетатного буфера молярной концентра
цией 0.05 моль/дм3с pH (5,0
1
0,2) и 0,008 см3 глюкуронидазы/арилсульфатазы. Инкубируют в течение
18 ч при температуре 52 °С в водяной бане.
8.5.2 При определении содержания диэтилстильбестрола, метилтестостерона. 19-нортестосте-
рона, тренболона, этинилэстрадиола и дексаметазона осуществляют гидролиз печени. Печень
измельчают ножницами, освобождая от жира и соединительной ткани. 5 г измельченной печени поме
щают в сосуд для диспергирования, механическим дозатором вносят 5 см3 натрий-ацетатного буфера
молярной концентрацией 0.05 моль/дм3с pH (5,0
1
0,2) и гомогенизируют. 1 г гомогената переносят в
чистый флакон типа фалькон. вносят 0.008 см3глюкуронидазы/арилсульфатазы, инкубируют в тече
ние 18 ч при температуре 52 °С в водяной бане.
8.5.3 При определении содержания диэтилстильбестрола. 19-нортестостерона. метилтестосте
рона и тренболона во флакон с гидролизатом мочи, полученным по 8.5.1. механическим дозатором
вносят 3 см3смеси гексана и бутанола и перемешивают в течение 30 с на приборе для встряхивания.
Центрифугируют в течение 10 мин при 4000 мин"1. Верхний слой переносят в чистый флакон. Нижний
слой экстрагируют повторно с тем же объемом смеси гексана и бутанола и центрифугируют в том
же режиме. Верхние слои объединяют. В объединенные верхние слои вносят 3см3смеси метанола
идис тиллированной воды и интенсивно перемешивают, отстаивают, нижний слой аккуратно
переносят механическим дозатором в круглодонную колбу вместимостью 50 см3. Экстракцию смесью
метанола и дистиллированной воды повторяют. Нижние слои объединяют и упаривают досуха
на роторном испарителе при температуре 50 вС — 55 °С.
Срок хранения сухого остатка при температуре минус 20 °С — 1 мес.
8.5.4 При определении содержания этинилэстрадиола и дексаметазона во флакон с гидролиза
том мочи, полученным по 8.5.1, добавляют механическим дозатором 0,004 см3 раствора гидроокиси
натрия молярной концентрацией 1 моль/дм3 (1 н). доводя pH до (7.0
1
0,2). Затем вносят 3,5 см3три-
хлорметана, перемешивают в течение 2 мин на приборедля встряхивания ицентрифугируют в течение
10 мин при 4000 мин-1. Нижний слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 см3. Верхний
• За исключением кленбутерола. для проведения анализа которого осуществляют подготовку проб в соответ
ствии с 8.4.
8