С. 8 ГОСТ 28573-90
натном растворе концентрации 0.05 моль/дм3 в соответствии с дозой, указанной на препарате, и
вносят в лунки панелей по 200 мм* в лунку. Панели выдерживают 18—20 ч при температуре
18 *С—20 *С (сенсибилизация). После сенсибилизации панели промывают фосфатно-буферным
раствором трижды, удаляют отмывочный раствор, в лунки вносят по 200 мм3 раствора яичного
альбумина с массовой долей I % и выдерживают 15 мин при температуре 18 *С—20 *С. Панели
промывают фосфатно-буферным раствором трижды и используют для постановки реакции.
7.3. Проведение анализа
В лунки панелей со специфическими АЧС и отрицательными антигенами вносят по 200 мм3
исследуемых сывороток больных и подозреваемых в заболевании свиней, взятых в пятикратном
разведении. Разведения сывороток готовят на фосфато-буферном растворе.
После 2 ч инкубации при температуре 37 *С панели промывают и в лунки вносят по 200 мм3
пероксидазного антисяиного конъюгата, разведенного на фосфатно-буферном растворе с яичным
альбумином с массовой долей I %, в рабочем разведении, указанном на ампуле препарата.
Влунку IA конъюгат не вносят (контрольная лунка). После 1 ч инкубации конъюгат удаляют:
панели промывают, как указано в п. 7.2, и в каждую лунку вносят по 200 мм3 раствора
субстрата. Когда раствор субстрата в лунках начинает окрашиваться (примерно через 20 мин), его
фотометрнруют на спектрофотометре при длине волны 495 нм. Язя визуальной оценки реакцию
останавливают при помощи раствора серной кислоты концентрации c(’/:!H,S04) = 0,2 моль/дм3,
внося в каждую лунку по 250 мм3.
7.4. Оценка результатов
При визуальной оценке результаты реакции учитывают по интенсивности окрашивания суб
страта. В лунках со специфической сывороткой и специфическим антигеном должно быть интен
сивное желтое или желто-коричневой окрашивание субстрата.
Влунках со специфической сывороткой и нормальным антигеном, отрицательной сыворотки
со специфических» и отрицательным антигенами окрашивания не должно быть.
При оценке результатов на спектрофотометре реакция считается положительной, если отно
шение положительных и отрицательных контроле!) составляет 2,1 и более раза. Исследуемые сыво
ротки считаются положительными с разведениями 1:125 и выше. Сыворотки, показывающие
положительную реакцию в разведениях 1:5 и 1:25, считаются сомнительными.