ГОСТ 28573-90 С. 7
6.4. Оценка результатов
При положительной реакции п клетках специфических тест-препаратов АЧС, обработанных
исследуемыми сыворотками и суспензиями органов, обнаруживают специфический антиген вируса
АЧС.
При отрицательной реакции в указанных тест-препаратах обнаруживают тусклое свечение
клеток серо-зеленого цвета.
7. МЕТОД ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
Сущность метола заключается во взаимодействии специфического антигена АЧС. фиксиро
ванного на твердой фазе с сыворотками АЧС и пероксидазным антисвиным конъюгатом, и реги
страции комплекса по остаточной ферментативной активности с помощью субстрата.
7.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Термостат.
Холодильник бытовой.
Спектрофотометр.
Панели пластиковые %-луночные по IT 92-2-428.
Микропипетка многоканальная регулируемая вместимостью 50—200 мм3.
Микропипетка одноканальная регулируемая вместимостью 50—200 мм3.
Натрия карбонат по ГОСТ 83.
Перекись водорода по ГОСТ 10929. растворе массовой долей 3 %\ готовятследующим образом:
к 10 см3дистиллированной воды добавляют 1 см3 раствора перекиси водорода с массовой долей
33 %.
Натрия бикарбонат по ГОСТ 4201.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный, 12-водный по ГОСТ 4172, раствор концентрации
c(Na,HPO, 12Н,0) = 0,2 моль/дм3, готовят следующим образом: 2,84 г двузамещенного форсфор-
нокислого натрия 12-водного растворяют в 100 см3дистиллированной воды.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233.
Натрий азид.
Калий хлористый по ГОСТ 4234.
Калий фосфорнокислый олнозамешенный по ГОСТ 4198.
Кислота лимонная по ГОСТ 3652, раствор концентрации 0,1 моль/дм5; готовят следующим
образом: 1,92 г лимонной кислоты растворяют в 100 см3дистиллированной воды.
Кислота серная по ГОСТ 4204. раствор концентрации с c(’/>H,SOj) = 2,5 моль/дм3.
Твин-20.
Раствор буферный карбонатио-бикарбонатный pH 9,5 для сенсибилизации пластин концент
рации 0.05 моль/дм5; готовят следующим образом: 0,795 г карбоната натрия. 0,100 г азида натрия и
1.465 г бикарбоната натрия растворяют в 500 см3бидистиллиропанной воды.
Раствор фосфатно-буферный (отмывочный); готовят следующим образом: 16,0 г хлористого
натрия, 0.400 г однозамешенного фосфорнокцелого калия, 5.8 г двузамещенного фосфорнокислого
12-водного натрия. 0,2 г хлористого калия и 1,6 см3твин-20 растворяют в 2 дм3биднетиллнрованной
воды.
Раствор ортофенилендиамнна (субстрат); готовят следующим образом: 40 мг ортофенидеи ди
амина растворяют в 100 см5буферного фосфатно-нитратного раствора pH 4.9. Перед использовани ем
к раствору добаатяют 1,4 см3раствора перекиси водорода с массовой долей 3 %.
Альбумин яичный лиофилизированный по ТУ 6-09-4477, раствор с массовой долей 1%; готовят
следующим образом: 1г яичного альбумина растворяют в 100 см3фосфатно-буферного раствора.
Альбумин бычий сывороточный лиофилизированный по ТУ 09-10-342.
Коныогат нммунопероксидазный антисвиной.
Антиген специфический АЧС.
Антиген отрицательный.
Сыворотка специфическая АЧС.
Сыворотка отрицательная свиная.
Вода дистиллированная.
Вода б идистилл иро вашгая.
7.2. Подготовка к анализу
Специфический АЧС и отрицательный антигены разводят в буферном карбонатно-бикарбо-