ГОСТ Р 53047—2008
С, — молярная концентрация ксилозы в контрольной пробе в соответствии с градуировочным гра
фиком, мкмоль/см3;
/ — продолжительность гидролиза, мин,
с — массовая концентрация ферментного препарата в 1см3рабочего раствора анализируемого
образца, г/см3, рассчитываютпо формуле
где т — масса навески ферментного препарата, г;
V — объем разведения навески при приготовлении основного раствора, см3;
Р — разведение основного раствора ферментного препаратадля приготовления рабочего раство
ра поп. 4.4.3.
4.6.3Заокончательныйрезультатпринимаютсреднеарифметическоезначениерезультатовдвух
параллельных определений, округленноедопервогодесятичного знака (X ± Д),ед/г, при доверительной
вероятности Р= 0.95. где Д =0.01ЙХ. Границы погрешности й = i 7 %.
4.7 Сходимость и воспроизводимость результатов
Результаты измерений, полученные в условиях повторяемости (сходимости), признаются удов
летворительными. если выполняется условно приемлемости:
|Х ,-Х 2|£ г 0,01 X.(3)
гдеX, иХ2 — результаты двух параллельных определений, полученные вусловиях повторяемости при
Р=0,95.ед/г;
X — среднеарифметическоедвух параллельныхопределений, ед/г;
г=5 % — предел повторяемости (сходимости).
Результаты измерений, полученные в условиях воспроизводимости, признаются удовлетвори
тельными, если выполняется условие приемлемости:
|Х ,-Х 2|£Р 0.01 X,(4)
гдеX, иХ^ — результатыдвух определений, выполненныхвдвух разных лабораториях, ед/г;
X — среднеарифметическоедвух определений, выполненных в двух разных лабораториях,
ед/г;
R = 10 % — предел воспроизводимости.
5 Определение ферментативной активности ксиланазы с окрашенным
субстратом
5.1 Характеристика метода
5.1.1 Метод основан на количественном определении степени деградации (гидролиза) специфи
ческогосубстрата — окрашенного производного ксилана (азоксилана) — в результатедействия ксила
назы (эндоксиланазы) при определенных стандартных условиях (температура 40 °С. pH 4.7,
продолжительность гидролиза — 20 мин). Диапазон измерений контролируемого показателя 500
— 1000 ед.КсА.
5.1.2 Вкачествесубстрата используют азоксилан.
5.1.3 Продукты реакции — олигомеры с «пришитым» красителем определяют по увеличению
поглощения при длине волны 490 нм.
5.1.4 Для определения активности ферментного препарата измеряют интенсивность окраски,
освобожденной им изокрашенного субстрата, в сравнении с образцом ксиланазы, имеющим известную
ферментативную активность.
5.1.5 Ферментативную активность исследуемого образца определяют по градуировочному гра
фику. построенному для образца ксиланазы с известной ферментативной активностью, и выражают в
единицах КсА по 4.1.2.
5.2 Сродства измерений, вспомогательное оборудование и реактивы
5.2.1Дляопределенияферментативнойактивностиксиланазы сокрашенным субстратом исполь
зуютсредства измерений иоборудование по 4.2.1, а также:
- прибортипа вортексили аналогичный, со скоростью встряхивания от 500 до 2500 мин’1;
- фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр (СФ)любого типа, которые обеспечивают
измерения при длине волны 490 нм, с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1
% (неболее0.01 единицы оптической плотности).
6