ГОСТ Р 53047—2008
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применяютследующие термины с соответствующими определениями:
3.1 гидролиз: Расщепление исходного соединения на два более простых в присутствии молекул
воды.
3.2 форментативный гидролиз: Гидролиз высокомолекулярных соединений под воздействием
катализаторов белковой природы — гидролитических ферментов (гидролаз, класс 3 [1]).
3.3 субстрат: Соединение или вещество, на которое воздействуетданный фермент.
3.4 ксилан: Высокомолекулярное соединение, полимер ксилозы с 0-1,4гликозидными связями, с
водой образует коллоидные растворы.
3.5 азо-ксилан: Высокомолекулярное соединение ксилана. к которому привязан хромофор -
азо-группа, имеющее желто-оранжевое окрашивание.
3.6 экзоксиланаза(системноеназвание:экзо-1,4-ксилозидаза,или |1>ксилозидаза,
К.Ф.3.2.1.37[1]): Фермент, катализирующий гидролиз (И .4связицепейксиланов, ксилоолигосахаридов,
ксилобиозы состороны концов, содержащихнередуцирующиеостатки ксилозы, с отщеплением свобод
ной ксилозы.
3.7 эндоксиланаза (эндо-1,4-|Н)-ксилан ксиланогидролаза. К.Ф.3.2.1.8[1]): Фермент, катали
зирующий гидролиз |V1.4ксилозидныхсвязейв цепи ксилановс неупорядоченным расщеплением моле
кулы на крупные фрагменты (олигосахариды).
4 Метод определения ферментативной активности ксиланазы
с субстратом ксиланом
4.1 Характеристика метода
4.1.1 Метод основан наколичественном определении редуцирующих(восстанавливающих)саха
ров. образующихся при действии ферментаксиланазы (экзоксиланазы)на |V1.4связиксилана при опре
делении в стандартных условиях.
Метод используется при возникновении разногласий в качестве арбитражного.
4.1.2 За единицу ферментативной активности ксиланазы (1 ед. КсА) принимают количество фер
мента. действующего на ксилан с высвобождением 1мкмоля восстанавливающихсахаров (в пересчете
наксилозу) за 1 мин при стандартныхусловиях(температура 50 °С. значениеpH 4.7. продолжительность
гидролиза 10 мин).
4.1.3 Содержаниередуцирующихсахаров, образующихся врезультатеферментативнойреакции,
определяют колориметрическим методом сДНС-реактивом при длине волны 540 нм и рассчитываютпо
градуировочному графику, построенномудляксилозы. Диапазонизмерений контролируемогопоказате
ля 180—5000 ед. КсА.
4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование и реактивы
4.2.1Для определения ферментативной активности ксиланазы используют следующиесредства
измерений и оборудование:
- фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр (СФ)любого типа, которые обеспечивают
измерения при длине волны 540 нм. с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более
1% (неболее 0,01 единицы оптической плотности):
- pH-метрлюбого типадля измерения в диапазоне от0 до 14pH. спределом допускаемой погреш
ности вэксплуатации ±0.1 единиц pH;
- магнитную мешалкулюбой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин-’;
- ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры i 1еС:
- весы лабораторные по ГОСТ24104, высокогокласса точности, снаибольшим пределом взвеши
вания 200 г, ценой поверочного деления 0.1 мг и пределом допускаемой погрешности в эксплуатации ±
0.15 мг; а также с наибольшим пределом взвешивания 1кг, ценой поверочногоделения 20 мг и преде
лом допускаемой погрешности вэксплуатации
1
30 мг;
- лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее
7000 мин-’;
- водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100 ± 1) °С;
- таймер любого типа с погрешностью ±30 с:
- секундомер с емкостью шкалы счетчика 1мин. ценой деления 1с ипогрешностью
а
1.5 с;
2