ГОСТ Р 53047—2008
растворовнафотоэлектроколориметре или спектрофотометре придлине волны 540 нм в кюветах стол
щиной поглощающего свет слоя 10 мм. против контрольной пробы на реактивы.
Пополученным значениям строятградуировочный графикоптической плотности(поглощения)как
функции от молярной концентрации ксилозы (мкмоль/см3). Рабочая зона градуировочного графика
лежит в пределах от 0,15до 0.65 единиц оптической плотности (ед. ОП).
Для построениякаждойточки градуировочного графикавычисляютсреднеарифметическое значе
ние оптической плотности трех параллельных измерений.
Градуировочный график строятдля каждой новой партии реактивов, а также при замене прибора.
4.4 Подготовка пробы
4.4.1 Отбор проб проводят по ГОСТ 20264.0.
Анализируемые образцы в форме порошка или микрокапсулированные можно использовать без
предварительной подготовки. Анализируемыеобразцы вформе гранулследуетизмельчать(например,
в механической мельнице или фарфоровой ступке) и просеивать черезсито сдиаметром отверстий не
более 1мм.
4.4.2 Приготовление основного раствора анализируемого образца
В плоскодонную стеклянную колбу помещают навеску анализируемого образца массой от 0.1 до
10 г’ сточностью до 0,2 мги суспендируют в небольшом количестведистиллированной воды (до 50см3)
на магнитной мешалкев течение 15мин (порошок, микрогранулы, микрокапсулы)или 60 мин (корма,
сме си кормовые). Суспензию количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3и
доводят объем дистиллированной водойдо метки. Полученную суспензию центрифугируют при
частоте враще ния 7000 мин-1 в течение 15 мин. Для анализа используют надосадочную жидкость.
4.4.3 Приготовление рабочего раствора анализируемого образца
Рабочийрастворготовятизосновного растворапо4.4.2 путем разведенияего вдистиллированной
воде таким образом, чтобы при определенииактивности оптические плотностиопытных иконтрольного
растворов находились в пределах рабочей зоны градуировочного графика.
Рабочий раствор должен содержатьот 0.5до 5,0 единиц активности в 1см3.
Раствор готовят вдень определения.
4.5 Проведение анализа
4.5.1 Втри пробирки (двеопытные иодну контрольную)вносят по1см3субстратаксилана по4.3.4.
Пробирки закрываютпробками, помещают вультратермостатстемпературой (50±1) °С ивыдерживают
в течение 5 мин.
4.5.2 Вдве опытные пробирки добавляютпо 1см3 рабочего раствора анализируемого образца по
4.4.3, предварительно прогретого при температуре 50 °С. и тщательно перемешивают. Три пробирки
(две опытные и одну контрольную) помещают в ультратермостат с температурой (50
1
1) °С на 10 мин (с
точностью, определяемой посекундомеру).
4.5.3 В контрольную пробиркувносят 1 см3рабочего раствораанализируемого образца по4.4.3. В
три пробирки (две опытные иоднуконтрольную)добавляют по 3см3реактиваДНС по4.3.3 итщательно
перемешивают.
4.5.4 Всетри пробирки помещают в кипящую водяную баню на 5 мин (с точностью, определяемой
по секундомеру).
4.5.5 Пробирки (две опытные и одну контрольную) охлаждаютдо комнатной температуры иколо-
риметрируютсодержимое нафотоэлектроколориметреили спектрофотометрепри длине волны540нм.
в кюветахс толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. против контрольной пробы на реактивы.
Еслизначенияоптических плотностей опытныхпроб находятся за пределами рабочей зоны граду
ировочного графика, определение активности следует повторить с раствором, имеющим большее или
меньшее содержаниефермента.
4.6Обработка результатов
4.6.1 Молярную концентрацию ксилозы (в мкмоль/см3) в опытных и контрольном растворахопре
деляют по градуировочному графику.
4.6.2 Ферментативную активность ксиланазы КсА в анализируемом образце, ед/г, рассчитывают
по формуле
КсА = <Ca~C j .О)
tc
где С0 — молярнаяконцентрация ксилозы в анализируемой пробе в соответствии с градуировочным
графиком, мкмоль/см3;
* В зависимости от предполагаемой активности.
5