ГОСТ Р 53047—2008
5.2.2Дляопределенияферментативнойактивностиксиланазысокращенным субстратом исполь
зуютлабораторную посуду и материалы по4.2.2. реактивы по4.2.3. а также:
- азоксилан;
- ксиланазу (внутренний стандарт) с известной ферментативной активностью, определенной в
разделе4;
- спиртэтиловый 96 % по ГОСТР 51652.
5.2.3. Все реактивыдолжны относиться к подгруппечистоты 2 (х.ч.) или 3 (ч.д.а.) по ГОСТ 13867.
5.2.4Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с
метрологическими характеристиками, а также реактивов по качеству не ниже указанных.
5.3Подготовка канализу
5.3.1 Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации 0.1 моль/дм3,
pH 4.7 проводят в соответствии с 4.3.1.
5.3.2 Приготовление раствора окрашенного субстрата
В коническую колбу вместимостью 200см3вносят 1.0 г азоксилана. добавляют40 см3дистиллиро
ванной воды. Колбу помещают на магнитную мешалкусобогревом, доводятдо кипения и кипятят 2 мин.
Затемуменьшаюттемпературунагревадо 50 ЭС — 70 °Сирастворвыдерживаютнамагнитноймешалке
еще 10 мин.
Колбусрастворомохлаждаютдокомнатнойтемпературы20 °С — 25 °С. Затем растворпереносят
в мерную колбу вместимостью 50 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемеши
вают.
Срокхранения при температуре 5 °С — 2 нед.
5.3.3 Приготовление рабочих стандартных растворов ксиланазы
5.3.3.1 Приготовление основного стандартного раствора ксиланазы
В мерную колбу вместимостью 50 см3помещают навеску ксиланазы. взвешенной с точностью до
0,0001 г, с известной активностью (например: 1.0000 гксиланазы с активностью 900 ед/г). растворяют в
небольшом количестве ацетатного буферного раствора по 4.3.1. тщательно перемешивают и доводят
объем до метки.
В мерную колбувместимостью 50 см3вносят2 см3полученного раствора, доводятдо метки ацетат
ным буферным раствором по4.3.1 иперемешивают.
5.3.3.2 Приготовление рабочихстандартных растворов ксиланазы
Из основного стандартного раствора ксиланазы по 5.3.3.1 готовят серию разведений в соотве
тствии с таблицей 2.
Т а б л и ц а 2
Объем основного стандартного раствора
ксиланазы, например с активностью
0.72 од/си3, С*
1
3
Объем буферного раствора, см5
Активность разведения стандартного
раствора ксиланазы. ед)’сы3
1.0
9.0
0.072
2.5
7.5
0.180
4.0
6.0
0.285
5.0
5.0
0.360
6.5
3.5
0.468
8.0
2.0
0.576
10.0
0.0
0.720
Рабочие стандартные растворы ксиланазы готовят в день построения градуировочного графика,
при этом берутпотрипараллельныхразведениядля приготовлениякаждойконцентрации растворакси
ланазы.
5.3.4 Построение градуировочного графика
В семьпробироквместимостью 10см3вносятпо0.5 см3окрашенногосубстратапо5.3.2. добавляют
по0.5 см3одногоизразведенийрабочегостандартного раствора ксиланазы всоответствиистаблицей2
и перемешиваютс помощью вортекса со скоростью встряхивания 1000 — 1500 мин-’.
7