ГОСТ Р 52996—2008
9.2 Калибровка прибора
Калибровочные кривые обычно стабильны. Прибор следует калибровать каждые три месяца.
Однако в случае, когда флуориметрустанавливаютвпервые или еслипроцедурыобслуживания влияют
на сохраненную калибровку, или если проверенные контрольные значения показывают неприемлемые
результаты, то его калибруют повторно.
Если обнаружены изменения в калибровочной кривой, прибор также калибруют повторно, исполь
зуя новыйнабор калибровочныхрастворовА. В иС(см. 5.4). Калибровочную кривую устанавливаютдля
каждого типа испытуемого продукта.
Перед использованием калибровочные растворы А. В и С смешивают, плавно переворачивая. С
помощью пипетки переносят по 2.0 см3калибровочных растворов А. В и С соответственно, каждого в
двух экземплярах, в шесть предварительно маркированных кювет. Помещают кюветы в инкубаторный
блок, установленный на 38 °С. ипредварительно нагреваютв течение 10 мин.
С помощью нагнетательной или вытеснительной пипетки добавляют 0.075 см3молока, не содер
жащего щелочной фосфатазы, в шестькювет. Закрывают кюветы парафильмом (см. 6.5). Перемешива
ют их содержимое с помощью вихревой мешалки в течение 5 с или путем мягкого переворачивания
кювет. Возвращают кюветы в инкубационный блок. Выполняют калибровку в течение 10 мин после
добавления испытуемогообразца в калибровочный раствор.
Начиная с калибровочногораствора А. выполняютследующиеустановившиеся процедуры калиб
ровки. Перед помещением кювет вфильтровальный Флуорофос® нажимают «CALIB» ивыбирают меню
«ALP Diary» (щелочная фосфатаза в молочных продуктах). Прокручивают меню и. когда отображается
продукт, который должен калиброваться, нажимают «ENTER». Начиная с калибровочного раствора А
помещают этот раствор во флуориметр и нажимают «START». Когда измерение закончено, измеряют
второй калибровочный растворА.
Такуюже процедурувыполняютдля калибровочных растворов Ви С, пока все процедуры небудут
закончены. Прибор Флуорофос® автоматически вычисляет значение флуоресценции, полученное с
калибровочными растворами В иСв сравнениис калибровочным растворомА. чтобы установитькалиб
ровочный коэффициент прибора.
Когда калибровка выполнена, приступают к анализу испытуемых образцов.
9.3 Определение
Спомощьюдозатора фиксированногообъема переносят2,0 см3субстрата вмаркированнуюкюве
ту. Помещают кювету в инкубаторныйблок, установленный на 38 °С. и нагревают втечение 15 мин.
С помощью пипетки добавляют 0,075 см3 хорошо перемешанного испытуемого образца (см. 8.2.2
или 8.2.3) к субстрату. Накрывают кювету парафильмом (см. 6.5). Сразу же перемешивают ее содержи
мое. используя вихревую мешалку (см. 6.6) в течение 5 с или плавно переворачивая кювету. Вытирают
кюветуснаружи мягкойтканью и помещаютее вфильтровальный флуориметр.
Нажимаютклавишу «TEST»,появляется надпись «ALP Diary», затем нажимают «ENTER». Прокру
чивают меню и нажимают «ENTER», когда отображается продукт, который должен анализироваться.
Затем нажимают клавишу «START», чтобы начать испытание. На дисплее будет идти обратный отсчет
60 с. пока субстрат и образец нагреетсядо 38 °С. Через 60 с флуориметр начинает измерение, показы
вая флуоресценцию образца в единицах флуоресценции (FLU). Отображение начинается с 200 FLU и
медленно возрастает в течение следующихдвух минут. В конце третьей минуты периода прибор Флуо
рофос автоматически выполняет необходимые вычисления и отображает идентификационный номер
образца, активность ALP в миллиединицах на литр и среднее увеличение флуоресценции, если это
было предварительно задано. Затем эта информация будет напечатана.
Делят разность между двумя показаниями флуоресценции на время интервала (записанное в
минутах), чтобы получить среднее увеличение флуоресценции в минуту (Ямин). Используют значение
Ямин, чтобы вычислитьактивностьALPдля испытуемого образца.
Прибор может отобразить на дисплее и распечатать сообщение «Error: Unstable Reading. Repeat
Test» (Ошибка. Нестабильное показание. Повторить испытание). В случае очень высоких результатов
нужно разбавить испытуемый образец термообработанном молоком, не содержащим фосфатазы, и
провестидругое испытание.
Для очень низких результатов (обычно 6 FLU/мин), когда нестабильные показания получаются
чаще, оставляюткюветус образцом в камереФлуорофос® ипроводят другое определение. Тогда обыч
но получается действительный результат. Однако, если снова возникает ошибка из-за нестабильных
показаний, повторяют все определение с новым испытуемым образцом.
9.4 Контрольные тесты
9.4.1 Контрольные проверки системы и реагентов
9.4.1.1 ТестA/D
4