ГОСТ Р 52833—2007
9.2 Амплификация
Раствор нуклеиновых кислотдобавляют в реакционную смесь и выполняютостальныеэтапы ПЦР
с использованием соответствующих профиля температура — время и количества циклов для системы
праймеров и реакционной смеси, используемых в соответствии с методом. Отсутствие ингибирования
ПЦРдолжно быть подтверждено использованием соответствующих контролей (например, внутренне
го положительного контроля).
9.3 Контроль процедуры испытаний
Контроли, необходимые для обнаружения патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах и
кормах методом ПЦР. перечислены втаблице 1.
На каждом этапе следует использовать соответствующие положительные контроли ПЦР (присут
ствует целевая последовательность) иотрицательные контроли ПЦР (отсутствует целевая последова
тельность).
Если один изосновных контролей недал ожидаемый результат, то в процедуруиспытанийследует
включатьдополнительные контроли (периодически или вкаждую реакцию).
Т а б л и ц а 1 — Контроли. необходимые для ПЦР-аналиэа
Наименование
этапа
Отрицатель
ный контроль
процесса"
Положитель
ный контроль
процесса"
Отрицатель
ный контроль
выделения0
Внутренний/
внешний контроль
амплификации*
Положитель
ный контроль
ПЦР’
Отрицатель
ный контроль
ПЦР’
П робоподготовка
♦
♦
-
-
-
В ы деление нуклеи
новы х кислот
♦
♦
_
+
-
-
-
А м плиф икация
♦
♦
+
+■
♦
♦
О бнаруж ение
♦
♦
+
+
♦
♦
* Частоту использования этого контроля определяет лабораторная программа обеспечения качества.
0 Контроль необязателен при использовании отрицательного контроля процесса.
" Внутренний или внешний контроль амплификации следует использовать в каждой ПЦР.
’ Контроль необходим для каждой партии проб в амплификаторе.
П р и м е ч а н и е — Знак «♦* означает, что на данном этапе используют контроль, знак «-» — не исполь-
зуют._________________________________________________________________________________________________
9.4 Подтверждение результатов ПЦР
Наличие ПЦР-продукта и его специфичность должны быть подтверждены соответствующей под
тверждающей реакцией (см. 4.5).
Положительный результат ПЦР может быть также подтвержден микробиологическим методом
культивирования.
10 Интерпретация результатов
Интерпретация возможна, если результаты для описанных в 9.3 контролей не противоречатдруг
другу-
Результаты ПЦР иих интерпретация приведены втаблице 2.
Т а б л и ц а 2 — Результаты ПЦР
Анализируе
мая проба
Положитель
ный контроль
процесса
Положитель
ный контроль
ПЦР
Отрицательные
контроли:
процесса,
выделения. ПЦР
Внутренний
контроль
амплификации
Внешний
контроль
амплификации
Интерпретация
реэультатоа
♦
♦
+
-
* /-
♦
П олож ительны й
-
♦
+
-
♦
♦
О трицательны й
-
♦
+
+
* / -
Н еоднозначны й"
-
-
+
-
-
-
Н еоднозначны й6
" В озм ож ная контам инация.
6 В озм ож ное ингибирование.
П р и м е ч а н и е — З нак * ♦ * означает, что обнаруж ен П Ц Р -продукт. знак « -» — не обнаруж ен П Ц Р -про-
дукт, знак «+/— в — результат контроля не соответствует ож идаем ом у.
6