ГОСТ Р 52831—2007
8.3 Иммуноаффинная очистка
Иммуноаффинной колонке (см. 6.13) дают достигнуть комнатной температуры. Присоединяют
шприц к верхней части иммуноаффинного картриджа. Отбирают 100 см3 приготовленного испытуемого
раствора (см. 8.1 или8.2), используя мерный цилиндр вместимостью 100 см3 (см.6.5)или пипетку.
Переводятанализируемую пробу вшприц ипропускаютчерез иммуноаффинную колонку спосто
янной медленной скоростью потока около 2—3 см3/мин. Используют гравитационную или вакуумную
систему (см. 6.17)для контроля скорости потока. Не следуетдопускать высыхания колонки. Промывают
колонку, используя 40 см3воды при постоянной медленной скорости потока. После промывки колонку
продувают досуха, промывочный раствор выбрасывают.
Устанавливают другой сухой чистый шприц на картридж. Медленно элюируют афлатоксин М, из
колонки, пропуская2.5 см3смесиацетонитрил/метанол (см. 5.2)и затем2.5 см3чистогометанола (5.1.4).
Даютэтим растворам контактироватьс колонкой не менее 1мин присоблюдениипостоянной медленной
скорости потока. Затем продувают колонку досуха.
Собирают элюат в пробирку с коническим дном и выпаривают до минимального объема (1-2 кап
ли).используяроторныйиспаритель(см. 6.8)при температуре<:40 °Силииспользуяслабый потоказота.
Не следуетиспарять элюатдо полной сухости, это позволитдостичь хорошего повторногосуспендиро
вания афлатоксина М,. присутствующего востатке пробы.
Добавляют200 мм3чистого ацетонитрила (см. 5.1.2) костаткупробы. Закрываютпробиркуиинтен
сивно перемешивают, используя мешалкувихревого типа (см.6.16). в течение 1мин. Испаряютснова до
минимального объема (1—2 капли), используя роторный испаритель (см. 6.8) при температуре <40 еС
или слабый потоказота.
П р и м е ч а н и е — Предыдущий этап необходим, чтобы избежать образования эмульсии и получить хоро
шее повторное суспендирование при добавлении смеси толуол/ацетонитрил.
Открываютпробиркуидобавляют 100 мм3смеситолуол/ацетонитрил(см.5.3)костатку пробы. Зак
рывают пробирку и снова интенсивно перемешивают, используя мешалку вихревого типа (см. 5.16), в
течение 1мин. Очищенную таким образом пробудля анализа хранятдо начала процедуры.
9 Проведение определения
9.1 Однонаправленная тонкослойная хроматография
Напластинкутонкослойнойхроматографии (см. 6.20)наносят 10—20 мм3очищенной пробы по
8.3. Добавляют аликвоты, например, по 5.10.20 мм3соответствующего рабочего стандартного рас
твора афлатоксина М,, приготовленного по 5.5.2 (растворА или В).
Пластинкупомещают в камеру длятонкослошюй хроматографии {см. 6.19), содержащую рас
твордля однонаправленнойтонкослойной хроматографии (см. 5.4.1). Хроматографиюпроводятдо тех
пор. пока фронтрастворителя недостигнет высоты примерно 10см.
Удаляют пластинку из камеры и оставляют ее сохнуть на воздухе. Считывают полученные пятна,
используя ультрафиолетовую лампу (см. 6.21) или денситометр (см. 6.22) при 365 нм. Сравнивают
интенсив>юсть флуоресценциипятна нахроматограммепробыс интенсивностями, полученнымидля
рабочих стандартных растворовафлатоксина Мг
Вычисляютсодержание афлатоксина М, в анализируемой пробе, какописано в разделе 10.
Если интенсивностьфлуоресценциипятна нахроматограммепробы вышепосравнению срабо
чим стандартным раствором афлатоксина М, самой высокой интенсивности флуоресценции, то оце
нивают уровень загрязнений. Исходя из этого уровня, разбавляют очищенную пробу для анализа
(см. 8.3)подходящим объемом смеси толуол/ацетонитрил (см. 5.3).
Повторяют процедурус разбавленной очищенной пробой, описанную в настоящем подразделе.
9.2 Двунаправленная тонкослойная хроматография
При появлении на хроматограмме помех вблизи флуоресцирующих пятен проводятдвунаправ
ленную тонкослойную хроматографию. Наносят на пластинку для тонкослойной хроматографии
(см. 6.20) 20 мм3очищенной пробы для анализа (см. 8.3). Добавляют по 5,10. 20 мм3рабочего стан
дартного раствора афлатоксина М,. приготовленного, как описано в 5.5.2. чтобы пропустить его в
направлении 1. и по 5,10, 20 мм3того же самого рабочего стандартного раствора афлатоксина М, (см.
5.5.2), чтобы пропустить его внаправлении 2 (см. рисунок 1).
Помещают пластинку в камеру тонкослойной хроматографии (см. 6.19), содержащую раствор
для однонаправленной тонкослойной хроматографии (см. 5.4.1). Хроматографируют (элюируют)
пластинку в первом направлениидо тех пор. пока фронт подвижной фазы недостигнетвысотыпример
но 7 см. Удаляют пластинку из камеры иоставляютее сохнутьна воздухе.
5