С. 10 ГОСТ 2778B-S8
Полученный раствор хранят н колбе с притертой пробкой при
температуре 4°С в защищенном от света месте нс более одного
месяца.
Гризина рабочий стандартный раствор концентрации 3 ЕД в
1 см3; готовят следующим образом: ! см3 основного стандартного
раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3,
дово дят до метки лимоннокислым буферным раствором,
получая раз ведение 1 : 100 (10 ЕД в 1 см3)! Затем берут
пипеткой 3 см3 это го разведения, помещают в пробирку,
добавляют 7 см3 лимонно кислого буферного раствора.
3.5.2.
Подготовка к испытанию
3.5.2.1.
Приготовление раствора испытуемого препарата
5
г пробы, взвешенной с погрешностью нс более 0,01 г, поме
шают в ступку, заливают 25 см3 соляной кислоты концентрации 0,2
моль/дм3 и растирают пестиком. Затем взвесь переносят в кол бу
или стакан, а ступку смывают 25 см3 раствора соляной кисло ты
концентрации 0,2 моль/дм3 и смыв добавляют в колбу.
Взвесь препарата выдерживают в течение 2—3 ч при комнат
ной температуре для экстракции гризина, периодически взбалты
вая, после чего содержимое колбы центрифугируют при 2000 мин-’
в течение 10—15 мин и фильтруют через бумажный фильтр, полу
чая таким образом разведение I : 10. Затем из этого раствора го
товят следующие разведения с помощью лимоннокислого буферно
го раствора (с учетом предыдущего разведения 1 : 10):
для кормогризина-10 — 1 : 1000; 1 : 2000; 1 : 4000;
для кормогрнзина-40— 1 : 4000; 1 : 8000; 1 : 16000.
3.5.2.2.
Подготовка кашек Петри с питательной средой и тест-
культурой
Чашки Петри тщательно моют, стерилизуют в сушильном шка
фу в течение 2 ч при температуре 160"С. В 6 чашек Петри зали
вают пипеткой по 15 см3 расплавленной голодной агаровой среды,
получая нижний слой. В 100 см3 расплавленной и охлажденной
до 60—65°С питательной агаровой среды вносят 1 см3 (10 между
народных единиц мутности) тест-культуры Вас. subtilis 6633 и
разливают в чашки Петри на застывший ннжннй слой голодной
агаровой среды по 7—8 см3.
После застывания агара в чашках делают по 6 лунок буром,
которые располагают по радиусам на расстоянии 2.8 см от центра
чашки с интервалом около 60". В 6 лунок каждой из двух подго
товленных чашек Петри вносят капельницей около 0,1 см3 рабо
чего стандартного раствора гризина. Чашки помещают в термо
стат при температуре 37Х и выдерживают в течение 16—18 ч, а
затем измеряют диаметры зон задержки роста тест-микроба.
Для проведения испытаний препарата на содержание в них
гризина используют партию питательной агаровой среды, обеспе
чивающей после действия рабочего стандартного раствора гризи-