I
С. 4 ГОСТ 202&4.2—88
Универсальный буферный раствор Уб» готовят смешиванием
девяти объемов дистиллированной воды с одним объемом буфер
ного раствора Уб<.
2.3.4. Приготовление реактива Фолина (основной раствор)
Для приготовления основного раствора Фолина в круглодонную
колбу с пришлифованным обратным холодильником вместимостью
2000 см3 наливают 700 см-5 дистиллированной воды, добавляют
100,00 г вольфрамовойцелого натрия и 25.00 г молибденовокислого
натрия. Затем приливают 50 см3 ортофосфорной кислоты с массо
вой долей 85% и 100 см* концентрированной соляной кислоты.
Смесь кипятят на слабом огне на асбестовой сетке и течение 10 ч.
Кипячение допускается прерывать.
В охлажденную смесь добавляют 150.00 г сернокислого литии,
50 см3 дистиллированной воды и пять капель брома. Открытую
колбу кипятят на слабом огне под тягой в течение 15—20 мин,
чтобы удалить избыток паров брома. Раствор должен иметь жел
тую окраску. После охлаждения раствор доводят дистиллирован
ной водой до 1000 см3 (при необходимости фильтруют через труб
ку Аллина, заполненную стеклянной ватой».
Приготовленный раствор хранят в склянке из темного стекла в
холодильнике. Через 2—3 мес хранения следует добавить в него
1—2 капли брома и снова прокипятить в течение 15—20 мни. По
казателем непригодности раствора считается его помутнение и
изменение окраски из желтой в зеленую.
Концентрацию реактива Фолина проверяют титрованием раз
бавленного 1:10 реактива Фолина раствором гидроокиси натрия
концентрацией 0.1 моль/дм* по фенолфталеину Реактив Фолина
должен быть концентрацией 2 моль/дм* но кислого. Если кислот
ность реактива Фолина больше 2 моль/дм3. то его разбавляют дис
тиллированной водой, если меньше — реактив для работы не при
годен.
Рабочий раствор Фолина готовится разведением основного рас
твора 1:2 (одна часть реактива Фолина и две части дистиллиро
ванной поды) для определения активности модифицированным ме
тодом Ансона и 1:3 (одна часть реактива Фолина и три части дис
тиллированнойводы)дляопределенияактивностиметодом
ФОЛП.
2.3.5. Приготовление раствора ферментного препарата
0.100—1,000 г исследуемого препарата (в зависимости от пред
полагаемой активности), тщательно растирают в стаканчике стек
лянной палочкой с небольшим количеством буферного раствора
Уб| с соответствующим pH реакционной смеси. Затем количествен
но переносят в мерную колбу вместимостью 100 см*, доводят этим
же буферным раствором объем жидкости до метки и перемеши
вают’ Из этого раствора готовят нс менее двух разведений п зави
симости от предполагаемой активности, используя этот же буфер
ный раствор.