ГОСТ 20264.2—88 С 9
Для испытания берут дне параллельные навески препарата.
Раствор ферментного препарата готовят непосредственно перед
определением.
3.2.2. Приготовление карбонатнобикарбонатногобуферного
раствора с pH 10.7
Для приготовления буферного раствора в мерную колбу вмес
тимостью 200 см* наливают 45 см* раствора углекислого натрия
концентрацией 0,2 моль/дм3 и 5 см* раствора двууглекислого нат
рия. Объем доводят до метки дистиллированной водой
3.2.3. Приготовление раствора с массовой долей казеина 1%
(субстрат)
2.000г казеинового порошка переносят в коническую колбу
вместимостью 250 см3 и приливают 140 см3 карбонатно-бикарбо-
натного буферного растэора с концентрацией водородных ионов
pH 10,7. Колбу ставят на магнитную мешалку и раствор переме
шивают в течение 30 мин, затем, продолжая перемешивать, кол
бу с субстратом помешают в водяную баню и нагревают до тем
пературы 40ЭС; pH при этой температуре доводят до 10,5 добав
лением (если необходимо) раствора гидроокиси натрия концент
рацией I моль/дм3. Далее раствор субстрата из конической кол
бы переводят в мерную колбу вместимостью 200 см3, охлаждают
проточной водой до 2(fC и объем субстрата доводят до метки кар-
бонзтно-бнкарбонатным буферным раствором. Срок хранения
субстрата в холодильнике но более 3 сут в плотно закрытой
склянке.
3.3. Проведение и с п ы т а н и я
В 3 пробирки (одна контрольная) наливают по 5 см* раствора
казеинаи выдерживаютв ультратермостате при температуре
40ЭС в течение 5 мин.
В первую пробирку (контрольную) добавляют 2,5 см3 дистил
лированной воды, в последующие — по 2.5 см3 испытуемого раст
вора ферментною препарата.
Содержимое пробирок тщательно перемешивают и выдержи
вают в ультратермостате в течение 60 мин при температуре 40°С.
По истечении времен» гидролиза в каждую из пробирок, на
чиная с первой (контрольной), добавляют по 5 см3 раствора ТХУ,
чтобы прервать ферментативную реакцию и осадить белок и вы
сокомолекулярные продукты гидролиза.
Смесь быстро перемешивают н зля полноты оезждения вы
держивают в течение 15 мин при температуре 40°С в ультратер
мостате. Затем растворы фильтруют через фильтровальную бу
магу и в фильтрате определяют количество прогндролизованного
белка по тирозину. Для этого берут три пробирки и в каждую
(начиная с контрольной) наливают но 2 см3 фильтрата, затем
медленно приливают в каждую по 5 см* раствора углекислого