ГОСТ 29112-91 С. 5
3.6. Определение содержания полипептидов
3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Фотоэлектроксшориметр или спектрофотометр.
Пробирки центрифужные.
Пипетки по ГОСТ 29227.
Центрифуга настольная типа ОПн-8—14.
Натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328, 10 %-ный раствор.
Медь сернокислая по ГОСТ 4165, 2 %-ный раствор.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.6.2. Подготовка к испытанию
3.6.2.1. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию поли
пептидов в процентах; по оси ординат —оптическую плотность раствора согласно данным, приве
денным в табл. 2.
Таблица 2
Концсптрииия полипептидов.
%
Ошичсская плошоегь
0,1
0.2
0.3
0.4
0.14
0.26
0,37
0.49
3.6.3. Проведение испытания
Из раствора, приготовленного по п. 3.5.3, отбирают по 5 см5 в 2 центрифужные пробирки,
добавляют 0,5 см’ 10 %-ного раствора гидроксида натрия и 0.5 см’ 2 %-ного раствора сернокислой
меди. Смесь хорошо перемешивают после добавления каждого реактива.
Параллельно ставят контрольную пробу на реактивы: вместо 5 см3 разведения плотной пита
тельной среды берут 5 см’ воды. Пробы центрифугируют с частотой вращения 5000- 6000 мин-1 по
10 мин.
Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при
540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм против контрольной пробы.
3.6.4. Обработка результатов
Концентрацию полипептидов в плотной питательной среде определяют по калибровочному
графику. Полученное значение умножают на 5 (разведение исходной среды).
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух
параллельных определений, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 5 %.
3.7. Определение массовой доли углеводов
3.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Весы ВЛР-500 или другие весы того же класса точности.
Колбы конические с притертыми пробками по ГОСТ 25336.
Пипетки, бюретки по ГОСТ 29227, ГОСТ 29251.
Йод по ГОСТ 4159, раствор концентрации с (IJ) = 0.1 моль/дм’.
Натрия тиосульфат по ГОСТ 27068, раствор концентрации с (1 Na2S2Oj 5 Н.О) =
= 0,1 моль/дм3.
Крахмал растворимый по ГОСТ 10163, растворе массовой долей 1 %.
Натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328, раствор с массовой долей 10 %.
Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор с массовой долей 10 %.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или деминерализованная.
3.7.2. Проведение испытания
Плотную питательную среду расплавляют в водяной бане, как указано в п. 3.3.2, охлаждают до
40—50 *С и берут навеску массой 5 г на технических весах с точностью до 0.01 г в стеклянный сосуд
вместимостью 100-200 см3. Добавляют 40 см’ дистиллированной воды температурой 40—50 ‘С.
10 см3 разведения переносят в коническую колбу с притертой пробкой, добавляют 10 см’
раствора йода концентрации с (1J) = 0,1 моль/дм3. Туда же вносят 1см3 10 %-ного раствора натрия
гидрата окиси. Оставляют стоять в темноте на 5 мин. Затем добавляют в колбу 1,5 см3 10 %-ного
раствора серной кислоты. Выделившийся йод отгитровывают раствором тиосульфата натрия кон
центрации с (1 Na2S20j •5 Н20) = 0.1 моль/дм3 до обесцвечивания (индикатор —крахмал).