ГОСТ I» 50928-96
Электронная версия
Построение градуировочных графиков можно заменить расчетом коэффициентов наклона К,
МЕ/е.о.п. или МЕ/мм, по формуле
L * ,
К Ш
п*
1
где К, — коэффициент наклона градуиро ючного графика для /-го градуировочного раствора,
МЕ/е.о.п. или МЕ/мм;
п — количество точек, по которым строится градуировочная кривая.
Значение коэффициента наклона Ху, МЕ/е.о.п или МЕ/мм. вычисляют по формуле
где С,.— содержание витамина Л в соответствующем /-м градуировочном растворе, ME;
Л. — высота /-го хроматографического пика, е.о.п. или мм.
3.2.7 Построение градуировочного графика для витамина £
0.02 г витамина Е-аиетата стандарта растворяют в изопропиловом спирте в колбе вместимос
тью 50 см3, доводят спиртом до метки и перемешивают. Получают основной раствор витамина Е
с концентрацией 0,4 мг/см3.
Из полученного основного раствора готовят рабочие растворы, содержащие 7, 5, 3. 1. 0,5, 0,1 и
0,05 мг витамина Е в 25 см3 раствора. Для этого соответственно 17,5; 12.5; 7,5; 2,5; 2.25; 1,25: 0,25;
0.125 см3 основного раствора помешают в мерные колбы вместимостью 25 см3 и объем доводят до
метки изопропиловым спиртом. Рабочие растворы анализируют на жидкостном хроматографе при
следующих условиях:
хроматографическая колонка 2x64 мм (2x80 мм), (2x120 мм);
сорбент —Силасорб C|S, Силасорб SPHCis, Сепарон C|S;
трехкомпонентный элюент на основе ацетонитрила;
объем пробы —6 мкдм3;
длина волны —286 нм;
скорость подачи элюента — 100 мкдм3/мин;
постоянная времени —0,2 с.
Удерживаемый объем пика витамина Е составляет 540—660 мкдм3 (может меняться в зависи
мости от дайны колонки).
Каждый раствор хроматографируют 2 раза. После выхода пика колонку промывают, прокачи
вая через нее 200—250 мкдм3 элюента до выхода на нулевую линию.
Значение средних высот хроматографических пиков (в единицах оптической плотности или
миллиметрах) откладывают по оси ординат градуировочного графика, а по оси абсцисс —значение
активности витамина Е в миллиграммах в 25 см3 раствора.
Построение градуировочного графика можно заменить расчетом коэффициента наклона К по
3.2.6.
3.2.8 Проверка градуировочных графиков
Градуировочные графики контролируют не реже I раза в неделю. Для этого 1—2 рабочих
растворов витаминов А, Е следует хроматографировать по 3.2.6 и 3.2.7.
Отклонение полученных результатов (высота пика, выраженная в единицах оптической
плотности или миллиметрах) от измеренных в момент построения градуировочного графика а. %,
определяют по формуле
(А. - А.) • 100
-------
-К—’
где А, и А, — высота хроматографического пика, определенная при построении градуировочного
графика и в момент проверки соответственно, е.о.п. или мм.
При отклонении более 5% строят новый градуировочный график по свежеприготовленным
растворам масляного препарата витамина А, витамина Е-ацетат стандарта.
4152