Электронная версия
ГОСТ Р 50928-96
3.2.5 Определение активности витамина А в мастном препарате
(0,1±().()02) г препарата растноряют в абсолютном спирте в мерной колбе вместимостью
50 см3-Доводят этим же спиртом объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Отбирают
1—2 см3 полученного раствора в колбу вместимостью 50 см3, заполняют ее до метки абсо
лютным спиртом и измеряют оптическую плотность полученного раствора на
спектрофото метре при длине волны 326 нм в кювете толщиной слоя I см. В качестве
контрольного раствора применяют абсолютный спирт.
Массовую концентрацию витамина А, X, г/см3, определяют по формуле
D ■Vx Vi d
Х = m V 100 - 1550’
где D — оптическая плотность раствора;
Vr V2 — первое и второе разведения, см3;
d — плотность препарата, г/см3;
т — масса навески препарата, г;
V — объем раствора, используемый для второго разведения, см3;
1550 — удельный показатель поглощения Е
х.ч
при длине волны 326 нм для 100%-ного раствора
витамина Л в абсолютном спирте;
100 — коэффициент.
Содержание витамина А в 1 см3 соответственно должно быть 0,0310 —0,0378 г (90000 —
110000 ME). 0.0619 - 0.0757 г ( 180000 - 220000 ME). 0,0774 - 0.0946 г (225000 - 275000 ME).
Полученные результаты используют для расчета содержания витамина Л в стандартном
растворе.
3.2.6 Построение градуировочного графика для витамина А
Для приготоатения стандартного раствора взвешивают навеску масляного препарата витамина
Л, необходимую для получения растворас активностью 30000 МЕв 50 см3или 600 МЕ/см3. Навеску
помешают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в изопропиловом спирте, перемеши
вают и доводят этим спиртом до метки.
Раствор хранят в холодильнике в емкости с притертой пробкой и используют в течение одной
недели.
Из этого раствора готовят градуировочные (рабочие) растворы, содержащие 120. 300.600. 1200,
3000. 6000, 12000 ME витамина Л в 25 см3. Для этого берут соответственно 0.2; 0,5; 1.0; 2.0; 5.0; 10,0;
20.0 см3 основного раствора, помешают в мерные колбы вместимостью 25 см3 и доводят до метки
изопропиловым спиртом.
Срок годности растворов не более 1 мес при хранении в холодильнике в емкости с притертой
пробкой при температуре 4—10"С.
Полученные рабочие растворы анализируют на жидкостном хроматографе «Мнлихром» при
следующих условиях:
хроматографическая колонка 2x64 (2x80), (2x120) мм;
сорбент —Силасорб C|S, Силасорб SPHC|S, Сепарон С|8;
трехкомпонентный элюент на основе ацетонитрила;
объем пробы —6 мкдм3;
длина волны —328 нм;
постоянная времени —0.2 с;
скорость подачи элюента — 150 мкдм3/мин.
Удерживаемый объем пика витамина А составляет 300—360 мкдм3 (может меняться в зависи
мости от длины колонки).
Каждый раствор хроматографируют 2 раза. После выхода пика колонку промывают, прокачи
вая через нее 100—200 мкдм3 элюента до выхода на нулевую линию.
Значения средних высот хроматографических пиков, выраженных в единицах оптической
плотности (е.о.п.), откладывают по оси ординат градуировочного графика, а по оси абсцисс —
значения активности витамина А в 25 см3 раствора.
Градуировочный график строят также, откладывая по оси ординат средние высоты хромато
графических пиков, выраженные в миллиметрах.
151
3