ГОСТ I» 50928-96
Электронная версия
Добавляют 0.1 г гидрохинона и 30 см* 10%-ного водно-спиртового раствора гидроокиси калия.
Подвергают омылению втечение 30 мин на водяной бане при температуре 85"С. Содержимое колбы
охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды, добавляют 30 см’ дистиллиро
ванной воды и 30 см3 гексана. Полученную смесь тщательно перемешивают и сливают вделитель
ную воронку вместимостью 200 см3.
После расслаивания нижний слой (водно-спиртовый) сливают в коническую колбу, а гекса
новый слой оставляют в делительной воронке. Эту операцию экстракции гексаном водно-спирто
вого слоя в конической колбе проводят еще дважды, каждый раз сливая в делительную воронку
гексановый слой.
Гексановые вытяжки объединяют и промывают в делительной воронке дистиллированной
водой порциями по 30 см3 до нейтральной реакции среды (проверяют по индикаторной бумаге).
Промытый экстракт переносят в сухую перегонную колбу, пропуская его через бумажный фильтр и
стой безводного сульфата натрия (40—50 г). Делительную воронку и фильтрующий материал
промывают свежими порциями гексана (20—30 см’).
Все гексановые растворы объединяют и помешают в колбу роторного испарителя. Температу ра
водяной бани роторного испарителя 70*С. После отгонки гексана сухой остаток растворяют в 3 см3
гексана и переносят в мерную предварительно откалиброванную пробирку с притертой пробкой.
Раствор может храниться в темном месте при температуре 4—8“С.
4.3.2 Омыление и подготовка к хроматографированию образцов премиксов
Навеску премикса массой 10 г взвешивают с погрешностью не более 0,0005 г. помешают в
коническую колбу вместимостью 250 см3, снабженную обратным холодильником. Добавляют
антиоксидант (0.1 г гидрохинона), 50 см3 водно-спиртового раствора щелочи и подвергают омы
лению на водяной бане при температуре 82—85*С в течение 30 мин.
По окончании омыления содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, добавляют
50 см3дистиллированной воды и 50 см3гексана, смесь тщательно перемешивают идают отстояться.
После расслаивания смеси гексановый слой осторожно сливают вделительную воронку вместимос
тью 500 см3.
Экстракцию гексаном повторяют дважды порциями по 50 см’, последнюю фракцию переносят
вделительную воронку, сливая содержимое колбы через воронку с марлевым слоем. Остаток на марле
слегка отжимают стеклянной палочкой и выбрасывают. Воронку обмывают дистиллированной водой
(около 50 см3) вделительную воронку, в которой собраны гексановые вытяжки. Содержимое воронки
промывают дистиллированной водой порциями по 50 см3до нейтральной реакции среды (по индика
торной бумаге). Промытый экстракт переносят в сухую перегонную колбу, пропуская его через
обеззоленный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия (около 50 г). Делительную воронку и
фильтрующий материал промывают 40 см3 гексана. Отгоняют гексан на ротационном испарителе при
температуре бани 70*С. Сухой остаток растворяют в 3 см3 гексана, который добавляют порциями, чтобы
перенести в предварительно откалиброванную пробирку с притертой пробкой.
Полученный экстракт используют для хроматографического анализа.
4.3.3 Подготовка жидкостного хроматографа к работе
Подготовка хроматографа осуществляется в соответствии с инструкцией по эксплуатации
прибора.
Перед началом измерений хроматограф прогревают в течение 15 мин. Сначала проводят
заполнение насоса элюентом. 13 качестве подвижной фазы используют смесь гексана с этанолом в
объемном отношении 99.5 : 0.5. Устанавливают скорость элюирования, соответствующую
эффективности колонки для конкретных премиксов от 0,5 до 2 см3/.мин. При определении
витаминов А, Е устанавливают светофильтр длиной волны 289 нм, для определения витамина D
—светофильтр длиной волны 254 им. Скорость движения диаграммной ленты регистратора
устанавливают равной 0,3—0,6 см/мин.
После промывания колонки элюентом регистрирующий прибор должен показывать нулевую
линию без дрейфа нуля. С целью повышения чувствительности и точности измерений для каждого
хроматографа подбирают оптимальные условия хроматографирования.
4.3.4 Проведение хроматографических игиерении
Для хроматографических измерений используют метод сравнения со стандартом. Сравнивают
высоты хроматографических пиков для анализируемой пробы и пробы стандарта.
В колонку последовательно вводят от 3 до 20 мкдм3 исследуемого раствора, стандартного
раствора витамина А и стандартного раствора витамина Е. Получают соответствующие хрома
тограммы при длине волны фотометрического детектора 289 нм, приложение Б. рисунок Б.1.
8
156