7
- Подготовка реактива 2 (НАДН)
Для приготовления реактива 2 растворяют одну таблетку реагента 2 по 5.12 в 1 см3 реактива 1.
Срок хранения реактива 2 при температуре 4 °С — не более 7 дней.
- Подготовка реактива 3 (НАДН-пероксидаза) и реактива 4 (сульфитоксидаза)
Реагенты 3 и 4 применяют, как реактивы, без разбавления.
Срок хранения реактивов 3 и 4 при температуре 4 °С — не более одного года.
- Стабильность реагентов
Все реагенты стабильны при температуре 4°C в течение одного года.
- Подготовка растворов реактивов в лабораторных условиях
- Приготовление буферного раствора триэтаноламина (0,60 моль/дм3, рН 8,0)
Растворяют 5,57 г триэтаноламина в 40 см3 дистиллированной воды в химическом стакане. Полученный раствор доводят до 8,0 ед. рН при помощи раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм3. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят его объем до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора при температуре 4 °С — не более 28 дней.
- Приготовление восстановленного никотинамидадениндинуклеотида, НАДН 7 х 10-3 моль/дм3
В химическом стакане растворяют 25 мг препарата НАДН-№2 по 5.5 и 50 мг гидрокарбоната натрия (NaHCO3) по 5.4 в 5 см3 дистиллированной воды.
Срок хранения раствора при температуре 4 °С — не более 28 дней.
- Приготовление суспензии НАДН-пероксидазы
Растворяют необходимое количество препарата НАДН-пероксидазы по 5.6 в растворе сульфата аммония молярной концентрацией 2 моль/дм3 для получения суспензии с активностью 15 ед. фермента НАДН-пероксидазы в 1 см3.
Срок хранения суспензии при температуре 4 °С — не более одного года.
- Приготовление суспензии сульфит-оксидазы
Растворяют необходимое количество препарата сульфит-оксидазы по 5.7 в растворе сульфата аммония молярной концентрацией 2 моль/дм3 для получения суспензии с активностью 2,5 ед. фермента НАДН-пероксидазы в 1 см3.
Срок хранения суспензии при температуре 4 °С — не более одного года.
- Приготовление раствора сульфата аммония (NH4)2SO4 молярной концентрации 2 моль/дм3
В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют 264 г сухого сульфата аммония в 500 см3 дистиллированной воды. После полного растворения сульфата аммония доводят объем раствора в колбе дистиллированной водой до метки.
Срок хранения раствора при температуре от 4 °С до 25 °С — не более 28 дней.
- Подготовка стандартного раствора общего диоксида серы массовой концентрации 305 мг/дм3
600 мг сухого сульфита натрия и 37 мг ЭДТА, взвешенных с точностью до 0,1 мг, растворяют в дистиллированной воде. Количественно переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см3. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой.
Стандартный раствор применяют для контроля достоверности результатов измерений.
Срок хранения раствора при температуре от 4 °С до 25 °С — не более семи дней с момента изготовления.
- Подготовка проб для измерений
- Соковая продукция
Подготовку проб соковой продукции для измерений проводят в соответствии с ГОСТ Р 53693 (подраздел 6.2). Если массовая концентрация природной или добавленной аскорбиновой кислоты в анализируемой соковой продукции превышает 100 мг/дм3, то осуществляют ее удаление из анализируемой пробы. Для этого в стеклянную пробирку объемом 10—15 см3 отбирают 2,0 см3 пробы, содержащей аскорбиновую кислоту, и корректируют кислотность до 5,0—6,0 ед. рН при помощи рН-метра раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 2 моль/дм3. Затем в течение 10 мин при перемешивании шпателем пробу обрабатывают препаратом аскорбатоксидазы активностью 20 Е. После ферментативной обработки препаратом аскорбатоксидазы рН пробы доводят до 7,5—8,0 ед. рН раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 2 моль/дм3. При этом фиксируют объем израсходованной гидроокиси натрия для расчета величины разбавления при подготовке рабочего раствора пробы по 7.3.4.
Для обесцвечивания окрашенной соковой продукции к пробе добавляют примерно 0,1 г поливи- нилполипирролидона по 5.28, перемешивают ее в течение 1 мин, затем фильтруют.
- Джемы, повидло, варенья, кисели, компоты
В гомогенизаторе обрабатывают 100 г пробы в течение 30 с. В мерную колбу объемом 50 см3 помещают 5 г гомогенизированной пробы, добавляют около 40 см3 дистиллированной воды, закрывают мерную колбу и раствор