ГОСТ 10444.2-94
Внесенную культуру тщательно размешивают и помешают п термостат при температуре
(36±1) ’С. Если через 6 ч коагуляции плазмы не произошло, то пробирки оставляютпри температуре
(30±1)*С на 24 ч. Если и через 24 ч плазма не скоагулировал а, то испытуемую культурустафилококка
относят к коагулазоотридательной.
При определении коагулазной активности реакцию считают отрицательной в тех случаях,
когда в плазме не образуются отдельные нити или сгустки, или в тех случаях, когда в плазме
появились отдельные нити (реакцию плазмокоагуляиии оценивают на один плюс).
Реакцию считают положительной, если:
в плазме образовался небольшой компактный сгусток (реакцию оценивают на два плюса);
в плазме образовался большой уплотненный сгусток (реакцию оценивают на три плюса);
плазма вся скоагулпровала, сгусток не меняет своего положения при перевертывании пробир
ки (реакцию оценивают на четыре плюса).
С целью ускорения выявления коагулазоположительпых стафилококков вместо суточных куль
тур. выросших на агаризованных средах, допускается применять культуру, выращенную на мясо-
пептонном бульоне, и использовать ее для постановки реакции плазмокоагуляиии спустя 2 ч после
появления видимых признаков роста микроорганизмов. При постановке реакции плазмокоагуляиии
к 0,5 см* разведенной плазмы лоба атяют две капли суточной бульонной культуры. Учет результатов
коагуляции плазмы вданном случае проводят в сроки от 30 мин до 2—4 ч. Оценка степени коагули
рования плазмы такая же, как описано выше.
При использовании сухой кроличьей нитратной плазмы руководствуются наставлением по ее
применению.
7.8.5 Определение ферментации мальтозы ванаэробных условиях
Способность ферментации мальтозы в анаэробных условиях определяют с целью дифферен
циации S. aureus от других коагулазоположительпых видов S. intermedius и S. liyicus subsp. hyicus.
Для определения ферментации мальтозы в анаэробных условиях культуры, подлежащие ис
следованию, высевают уколом петлей в среду Гисса с мальтозой, приготовленную по п. 6.2.9. На
поверхность среды наслаивают голодный агар, приготовленный по ГОСТ 10444.1 п. 4.1 высотой 2-
2,5 см.
Посевы инкубируют при температуре (36±1) *С в течение 48 ч.
При ферментации мальтозы в анаэробных условиях с образованием кислоты цвет среды Гисса
изменяется.
S. aureus —ферментирует мальтозу в анаэробных условиях. S. intermedius —слабо ферменти
рует мальтозу в анаэробных условиях, S. hyicus subsp. hyicus —не ферментируетмальтозу в анаэроб
ных условиях.
7.9 Интерпретация результатов подтверждения принадлежности характерных колоний к
S. aureus
Если при испытании характерных колоний в них обнаружены грамположительные кокки,
способные коагулировать плазму крови, образующие каталазу, ферментирующие мальтозу в анаэ
робных условиях, то считают, что выявленные микроорганизмы относятся к S. aureus.
7.10 Определение термостабнлыюй нуклеазы
Способность выявленного S. aureus образовывать термостабильную нуклеазу устанавливают
при необходимости, для определения его потенциальной энтеротоксигенности.
Для определения термостабильной нуклеазы в среде, приготовленной по п. 6.2.6 и разлитой
по стерильным чашкам Петри, вырезают асептически колодцы диаметром не более 4 мм, расстоя
ние между колодцами должно быть не менее 7—8 мм. Культуры, выросшие на мясо-пептонном
бульоне после инкубирования при температуре (36±1) ’С в течение 24 ч. прогревают в
кипящей водяной бане в течение 15 мин, охлаждают до комнатной температуры и вносят в
приготовленные в среде колодцы пастеровской пипеткой по 1—2 капли. Засеянные чашки помешают
втермостат при температуре (36±1) "С. результаты учитывают через 1, 2 и 5 ч. При наличии
термостабильной нуклеазы появляется ярко розовая зона вокруг колодца на синем фоне среды.
Способность S. aureus образовывать термостабильную нуклеазу подтверждает его энтеротоксн-
генпые свойства.
5