ГОСТ Р 51258-99
4 Сущность метода и реакции
4.1 Сущность метода
Метод определения глюкозы основан на фосфорилировании глюкозы, содержащейся в освобож
денном от жира it белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, под действием
ЛТФ в присутствии фермента ГК. окислении образовавшейся Г-6-Ф поддействием НЛДФ в присут
ствии фермента Г’бФ-ДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НЛДФН.
эквивалентной массовой доле глюкозы в пробе (свободная глюкоза).
Метод определения сахарозы основан на гидролизе сахарозы, содержащейся восвобожденном от
жира и белка подлом экстракте пробы молока или молочных продуктов, в присутствии фермента ФР
до глюкозы и фруктозы, фосфорилировании и окислении имеющейся в пробе глюкозы (обшая
глю коза —свободная глюкоза плюс образовавшаяся при гидролизе сахарозы) под действием
ЛТФ в присутствии фермента ГК. окислении образовавшейся Г-6-Ф под действием НЛДФ в
присутствии фермента Г6Ф-ДГ, фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося
НЛДФН, эквивален тной массовой доле глюкозы, и расчете содержания сахарозы по разности
оптических плотностей данного раствора и раствора, используемого при определении свободной
глюкозы.
4.2 Реакции
В фотометрической кювете протекают следующие ферментативные реакции:
сахароза + Н.О —- глюкоза + фруктоза;(1)
глюкоза + ЛТФ — ——►Г-6-Ф + АДФ;(2)
Г-6-Ф + НЛДФ-ГЛ-6-Ф + НЛДФН + Н*.(3)
5 Реактивы
При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.
Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллнрованной.
Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб,
должна бытьдистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.
Допускается использование имеющихся в продаже готовых наборов реактивов дтя определения
сахарозы и глюкозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.
Препараты динатриевой соли р-никотинамидадениндинуклеотндфосфата ф-НЛДФ-Na,) иди-
натрневой соли аденозин-5 -трифосфата (АТФ-№,Н,хЗН,0) должны содержать не менее 90 %основ
ного вещества.
5.1 Раствор сернокислого цинка
30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 (ZnS04x7H,0) растворяют в 100см*дистиллированной
воды по ГОСТ 6709. Раствор хранят при комнатной температуре 12мес.
5.2 Раствор гексациамо-(П)-феррага калия
15 ггексациано-(П)-феррата (KJFe(CH)(x3H_.0) калия растворяютв 100см’дистиллированной
воды. Раствор хранят при температуре 4 ’С 1мес.
5.3 Раствор гидроокиси натрия
8 г гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 растворяют в 100 см* дистиллированной воды. Раствор
хранят при комнатной температуре 12мес.
5.4 Цитратный буферный раствор
4,55 г тринатрийцитратадигидрата (CeH.07Na,x2H,0) и 3,45 г моногидрата лимонной кислоты
по ГОСТ 3652 (CJ^O.xH.O) растворяют в 70 см* дистиллированной воды. Активную кислотность
раствора устанавливают равной 4.6 pH раствором гидроокиси натрия по 5.3. Объем раствора
доводят дистиллированной водой до 100см’. Буферный раствор устойчив при температуре 4 "С 12
мес.
5.5 Раствор ФР
Сухой лиофилизат ft-фруктозндазы издрожжей массой 0,005 г и активностью 1500 Е растворяют
в 2 см’бидистиллнрованной воды. Конечная удельная активность раствора соответствует 750 Е/см*.
Раствор устойчив при температуре 4 *С одну неделю.
2