ГОСТ 25999-83 С. 5
Для приготовления раствора рибофлавина с массовой концентрацией 0,001 г/дм3 отбирают
5.0 см3 раствора с массовой концентрацией 0,02 г/дм3 в мерную колбу вместимостью 100 см3,
доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
3.3.2. Приготовление гидрашзата
Приготовление гидролизата проводят по п. 2.3.4, с дополнением, указанным ниже.
Для определения поправки на содержание витамина В, в ферментах одновременно проводят
контрольный опыт. В мерную колбу вместимостью 250 см3 помешают 150 см3 раствора соляной
кислоты с (НС1) = 0,1 моль/дм3, устанавливают с помощью раствора уксуснокислого натрия
величину pH 4,2—4.5. Прибавляют 0.10 г амилоризина Г110Х или по 0,10 г амилоризина П10Х и
пектаваморина П10Х и выдерживают в термостате при 37 *С в течение 12—16 ч.
При использовании амилоризина П10Х и пепсина в колбу с раствором соляной кислоты
с (НО) = 0,1 моль/дм3прибавляют сначала 0,10 г пепсина и выдерживают в термостате 4 ч при той
же температуре. Затем устанавливают величину pH 4,2—4.5, прибавляют 0,10 г амилоризина П10Х
и снова выдерживают 12—16 ч при 37 ’С. После этого содержимое колбы охлаждают, доводят до
метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют.
Контрольный опыт проводят один раз для каждой партии ферментов.
3.4. П р о в е д е н и е а н а л и з а
3.4.1.В две колбы вместимостью 50 см3 каждая помещают по 10.0 см3 гидролизата пробы, в
третью колбу — 10,0 см3 гидролизата контрольного опыта. Водну колбу с анализируемым гидроли затом
прибавляют 1.0 см3стандартного раствора рибофлавина с концентрацией 0,001 г/дм3, в две другие —по
1.0 см3дистиллированной волы. Во все колбы прибавляют по 1.0 см3 ледяной уксусной кислоты, 0.50 см3
раствора марганцовокислого калия, перемешивают и выдерживают 2 мин. Затем прибавляют по 0,50
см3раствора перекиси водорода и снова перемешивают. Через 5 мин измеряют интенсивность
флуоресценции сначала раствора с добавкой рибофлавина, затем раствора без добавки и
контрольного опыта. Измерение интенсивности флуоресценции каждого раствора про
изводятсначалабез прибавления гидросульфита натрия, затем после его прибавления. Гидросульфит натрия
прнбаатяют порциями по 0,02—0,05 г, быстро перемешивают и снова производят измерение.
Эту операцию повторяют до установления наименьшей интенсивности флуоресценции.
3.5. О б р аб о т к а р е з у л ь т ат о в
Массовую долю витамина В, (Л",) в процентах вычисляют по формуле
_
|
<
Л
—
А
х
)
—
(С
—
С ,)
|
-Ь -У-
100
1
и
д
-
Д,)
— (А - A t ) \ .у , -т’
где А —интенсивность флуоресценции раствора анализируемой пробы до прибавления гидросуль
фита натрия;
Л, — интенсивность флуоресцениин раствора анализируемой пробы после прибавления гидро
сульфита натрия;
С — интенсивность флуоресценции раствора контрольного опыта до прибаатення гидросульфита
натрия;
С, — интенсивность флуоресцениин раствора контрольного опыта после прнбаатепия гидросуль
фита натрия;
Д — интенсивность флуоресценции раствора ан&тизируемой пробы с добавкой рибофлавина до
прибаатення гидросульфита натрия;
Д1— интенсивность флуоресценции раствора анализируемой пробы с добавкой рибофлавина
после прибаатення гидросульфита натрия;
b — масса рибофлавина в стандартном растворе рибофлавина, добаатенная в гидролизат анали
зируемой пробы, г;
V— общий объем гидролизата, см3;
Г, — объем гидролизата, взятый для окисления, см3;
т — масса навески продукта, г.
117