ГОСТ Р 51197-98
П р и м с ч а н и с — Объем фильтрата может быть иным. Сю выбирают так, чтобы концентрация
D—(+)-глюконата была приблизительно 0,40 г/дм5.
8.4 Определение
8.4.1 Для проведения ферментативной реакции берут две фотометрические кюветы (6.11), в
каждую из которых пипеточным дозатором (6.5) добавляют:
- 2,50 см* буферного раствора (5.3);
- 0.10 см* раствора НЛДФ (5.4);
-0,10 см* раствора АТФ (5.5).
Затем в одну кювету вносят 0,20 см5 экстракта (8.3.6), получая исследуемый раствор, а во
вторую — 0.20 см* воды, получая контрольный раствор.
В каждую кювету вносят по 0,05 см* суспензии 6-ФГДГ (5.6) и тщательно перемешивают
содержимое пластиковыми шпателями или стеклянными палочками (6.9).
Содержимое кювет выдерживают 5 мин при комнатной температуре, после чего измеряют
оптические плотности относительно воздуха при длине волны 365 нм: А, — оптическая плотность
исследуемого раствора, Аи — оптическая плотность контрольного раствора.
8.4.2 В обе кюветы вносят по 0,01 см3 суспензии ГК (5.7). содержимое кювет перемешивают
пластиковыми шпателями или стеклянными палочками (6.9).
Растворы выдерживают от К) до 15 мин при комнатной температуре. Затем измеряют оптичес
кие плотности, повторяя измерения каждые 2 мин до достижения постоянных значений.
Строят графики зависимости оптических плотностей растворов от времени и экстраполируют
их на момент внесения фермента ГК (приложение А).
Получают экстраполированные значения оптических плотностей исследуемого (/!,) и кон
трольного (Л2к) растворов.
8.5 Выполняют два параллельных определения в двух пробах из одного и того же образца (8.1).
9 Правила обработки результатов измерений
9.1 Метод расчета
Массовую долю глюконо-5-лактона в пробе X, %, вычисляют по формуле
X -
0,908 х ДЛ х
2.96x196,1100100 .
к х 0.2 х 1000 1000 V
Л/хШ
100 ’100
$0 т
77
Н
7
к Vx
* 52,705 х .
х
-\А
m
х (100 +~
100
~ >»
где д А = (Л, — Л,) — (Л2к —Л|к);
196,1— молярная масса D —(+)-глюконовой кислоты;
М— массовая доля влаги в пробе, определенная в соответствии с ГОСТ 9793;
т— масса навески (8.2), г;
к— микромоляриый коэффициент оптической плотности НАДФН (к = 3,5 см2/мкмоль при
длине волны 365 нм и к = 6,23 см2/мкмоль при длине волны 340 нм);
V — объем фильтрата, взятый на определение (8.3.6), см3.
За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух парал
лельных определений при условии выполнения 9.2.
Результат определяют с точностью 0.01 %.
9.2 Сходимость
Относительное расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в
одной лаборатории, не должно превышать 10 % среднеарифметического значения.
10 Примечания по методике
10.1 Измерение может быть проведено также при длине волны 340 нм.
10.2 Неорганические соли (ионы фосфата, натрия, калия и аммония) могут замедлять фер-
4
114