ГОСТ Р 51128-98
8.1 П р и г о т о в л е н и ео п ы т н о йп р о б ы
В кювету- спектрофотометра вносят 2,0 см3буферного раствора активной кислотностью 7,4 pH.
0.1 см3раствора сульфата марганца, 0,1см3раствора НЛДФ и 1,00 см3исследуемого раствора пробы,
подготовленного по разделу 6. Смесь перемешивают, выдерживают в течение 3 мин и измеряют
оптическую плотность раствора —M,)npoCt относительно воздуха.
8.2 Р е а к ц и я сф е р м е н т о ми к о л и ч е с т в е н н ы йа н а л и з
К подготовленному в кювете по 8.1 раствору добавляют 0,01 см3 раствора ИЦДГ. Раствор
перемешивают. Через 10 мин (окончание реакции) измеряют оптическую плотность (Л,)пров, рас
твора относительно воздуха.
Через 5 мин проводят контрольное измерение. Если оптическая плотность меняется, измере
ния проводят каждые следующие 5 мин до тех пор. пока не будет достигнута постоянная величина
ее приращения. В этом случае оптическую плотность раствора <Л,)1|рий| определяют экстраполяиней
на момент внесения раствора ИЦДГ.
8.3 К о н т р о л ь н о еи с п ы т а н и е
Контрольное испытание проводят параллельно с основным. В кювету спектрофотометра
вносят 3,0 см’ буферного раствора активной кислотностью 7.4 pH и 0,1 см раствора НЛДФ. Смесь
перемешивают, выдерживают в течение 3 мин и измеряют оптическую плотность (>*,)КО|1гр0Л1
относительно воздуха.
К подготовленному в кювете раствору добавляют 0,01 см3 раствора ИЦДГ, перемешивают и
через 10 мин измеряют оптическую плотность раствора (■^2)кон1роль, как в 8.2.
9 Выражение результатов
Основой данного метода является линейная зависимость между образующимся количеством
НАДФН и количеством D-изолимонноЙ кислоты.
Разность измеренных оптических плотностей АЛ вычисляют по формуле
А А —(Л2А)|,ров» “ (^2’’Mtcciipn.ik-(2)
Массовую концентрацию D-изолимонной кислоты в пробе X, мг/дм3, вычисляют по формуле
_ М Vt F 1000
х£ / К, 1000Л/4’<3>
где Л/—молярная масса D-изолимонной кислоты.Л/= 192,1 г/моль;
Г, —суммарный объем раствора в кювете,см3:
F — фактор разведения пробы в процессе выделения D-изолимонной кислоты,рассчиты
ваемый как отношение объема разведенной пробы к объему, взятому для разведения;
е — молярный показатель поглощения НЛДФН.
при 340 нм —е =6,3 дм3ммоль- 1•см-1,
при 365 нм —е =3,5 дм3ммоль- 1 см- 1(ртутная лампа),
при 334 нм —е =6.18 дм3ммоль_ 1 см~‘ (ртутная лампа);
/ — рабочая длина кюветы,см;
У, — использованный для приготовления измеряемого раствора объем пробы.см3.
Для указанных в прописи объемов растворов массовую концентрацию D-изолимонной кис
лоты в пробе X, мг/дм3. вычисляют по формуле
Х = 3083^4-^(4)
При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численный коэффициент (3083)
в формуле (4) может быть иным из-за изменения суммарного объема раствора в кювете (Г,).
4108