ГОСТ I» 51484-99
8Проведение определения
.
8.1 Нейтрализация пробы гидроокисью натрия
Растворяют (1()±1) г испытуемой пробы в 100 см3 гексана или легкого петролейного эфира
(5.1.2) и переносят раствор в делительную воронку (6.1.5). Приливают 50 см3 изопропилового или
этилового спирта (5.1.1), несколько капель раствора фенолфталеина (5.1.5) и объем гидроокиси
натрия (5.1.4). эквивалентный содержанию свободных жирных кислот жира или масла, с избытком 0,5
%. Тщательно перемешивают в течение 1 мин и приливают 50 см3 воды, вновь перемешивают и дают
отстояться. После разделения слоев сливают нижний слой, содержащий мыло, и промежуточ ные
слои (слизистые и нерастворимые вещества). Промывают раствор нейтрализованного масла в
гексане или легком петролейном эфире последовательными порциями по 25 см3 раствора изопро
пилового или этилового спирта (5.1.3) до тех пор, пока розовый цвет фенолфталеина не исчезнет.
Переносят раствор в колбу ротационного испарителя (6.1.3) и выпаривают большую часть
растворителя под вакуумом. Высушивают масло при 30 -40 “С под вакуумом в токе азота (5.1.7) до
тех пор. пока растворитель не будет удален полностью.
8.2 Очистка пробы пропусканием через окись алюминия
Готовят суспензию из 15гактивированной окиси алюминия (5.1.6) в 50 см3гексана или легкого
петролейного эфира (5.1.2) и заполняют ею при постукивании хроматографическую колонку (6.1.2).
Убеждаются, что окись алюминия ровно заполнила колонку, оставляют слой растворителя на
1—2 мм выше верхнего уровня адсорбента. Осторожно приливают в колонку приготовленный и
нейтрализованный (если необходимо) раствор 5 г испытуемой пробы в 25 см3 гексана или легкого
петролейного эфира (5.1.2) и собирают весь элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3
(
6
.
1
6
)
.
Удаляют большую часть растворителя выпариванием в ротационном испарителе под вакуумом,
затем высушивают масло при 30—40 ’С под вакуумом в токе азота (5.1.7) до тех пор, пока
растворитель не будет удален полностью.
8.3 Гидролиз триглицеридов
8.3.1 Взвешивают навеску продукта массой (0,1±0.01) г очищенной испытуемой пробы (8.2) в
центрифужную пробирку вместимостью 10 см3 (6.2.2). Если эта навеска не жидкая при комнатной
температуре, помещают пробирку в ячейку водяной бани при температуре 60—65 *С. Если при этом
навеска не расплавится полностью, ее продолжают выдерживать в бане, но не более 10 с.
Вынимают пробирку из водяной бани и продолжают выполнять в быстрой последовательности
испытания в соответствии с 8.3.2—8.3.5.
8.3.2 Добавляют к жидкой навеске предварительно взвешенные 20 мг липазы (5.2.6) и 2 см3
буферного раствора (5.2.5). Осторожно встряхивают и добавляют последовательно 0,5 см3 раствора
холата натрия (5.2.3) и 0,2 см3 раствора хлорида кальция (5.2.4). Закрывают пробирку пробкой,
осторожно встряхивают и сразу же помешают пробирку в ячейку водяной бани при 40 "С. выполняя
ручное встряхивание в течение (60±2) с. Все операции до начала ручного встряхивания должны быть
выполнены за 30 с.
8.3.3 Извлекают пробирку из водяной бани и интенсивно встряхивают при 40 ’С в течение
(120±2) с, используя встряхиватель (6.2.3).
8.3.4 Незамедлительно приливают I см3 соляной кислоты (5.2.2) и 1 см3 диэтилового эфира
(5.2.1). Закрывают пробкой и интенсивно встряхивают на встряхивателе (6.2.3).
8.3.5 Центрифугируют содержимое центрифужной пробирки и переносят органическую фазу
в пробирку для испытания с помощью шприца (6.2.5). Если проба была твердой при комнатной
температуре, повторяют экстракцию с еще I см3 диэтилового эфира и объединяют экстракты
в пробирке для испытания.
8.4 Отделение 2-моноглицеридов
8.4.1 Подготовка пластинок
Тщательно очищают стеклянные пластинки (6.3.3) этиловых» спиртом (5.3.1), гексаном или
легким петролейным эфиром (5.3.2) и ацетоном (5.3.3) до тех пор. пока жировые вещества не будут
удалены полностью.
1654