ГОСТ 34533—2019
Затем через картридж пропускают полученный в соответствии с 7.2 экстракт (на всех этапах твердо
фазной экстракции, кроме этапов сушки, вакуум или избыточное давление не применяют). Промывают
картридж 2 см3 деионизированной воды, сушат в вакууме водоструйного насоса в течение 10 мин и
элюируют аналиты 2 см3 ацетонитрила в новую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3.
Элюат помещают на нагревательный модуль и упаривают в токе воздуха при температуре 40 °С до
0,1—0,2 см3. К полученному остатку приливают 1 см3 деионизированной воды и помещают в ультра
звуковую баню на одну минуту или перемешивают с использованием устройства вортексного типа.
Полученный экстракт фильтруют через мембранный фильтр в виалу и используют для ВЭЖХ-МС/МС
анализа.
8 Порядок выполнения анализа
8.1 Условия хроматографического разделения
8.1.1 Хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по экс
плуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и
хроматографического разделения.
8.1.2 Например, для колонки длиной 150 мм с обращенно-фазовым сорбентом с частицами раз
мером не более 5 мкм соблюдают следующие условия хроматографического анализа:
- температура колонки — 40 °С
- скорость потока подвижной фазы — 200 мм3/мин;
- объем вводимой пробы — 20 мм3.
8.1.3 Разделение проводят в режиме градиентного элюирования. В качестве подвижной фазы А
используют деионизированную воду, в качестве подвижной фазы Б — метанол. Измерение каждой про бы
проводят дважды: в режиме регистрации положительных ионов и в режиме регистрации отрицатель ных
ионов.
При регистрации положительных ионов: в начальный момент по 0,5 мин — соотношение фаз А/Б
по объему (90/10); с 0,5 по 20,0 мин — градиентное элюирование к 40 % фазы Б; с 20,0 по 23,0 мин —
соотношение фаз А/Б по объему (60/40); с 23,0 по 23,2 мин — переход к 100 % фазы Б; с 23,2 по 25,0 —
подаются 100 % фазы Б; с 25,0 по 33,0 мин — уравновешивание колонки при соотношении фаз А/Б по
объему (90/10).
При регистрации отрицательных ионов: в начальный момент до 0,5 мин — соотношение фаз А/Б
по объему (75/25); с 0,5 по 4,0 мин — градиентное элюирование до 100 % фазы Б; с 4,0 по 6,5 мин по
даются 100 % фазы Б; с 6,5 по 13 мин — уравновешивание колонки при соотношении фаз А/Б по
объ ему (75/25).
Детектирование пиков проводят методом «регистрации множественных реакций» (MRM). Для
каждого соединения измеряют сигнал для двух ионов согласно таблице 3.
Таблица 3 — Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях электроспрея с регистрацией поло
жительных или отрицательных (—) ионов
Аналит
Ион-предшественник,
m/z
Ион-продукт, m/z
Время удержи
вания, мин
Нитроимидазолы
Диметридазол
142,181,196,19,5
Диметридазол-Оэ*
145,199,19,3
Ронидазол-03*
204,1143,16,5
Ронидазол
201,1140,1110,16,9
Ипронидазол
170,1124,1109,119,6
Ипронидазол-03*
173,1127,119,4
Гидроксиипронидазол
186,1168,1122,115,6
Гидроксиипронидазол-03*
189,1171,115,3
10