ГОСТ Р 57163—2016
Приложение Б
(обязательное)
Методы культивирования тест-организмов
Б.1 Условия культивирования тест-организмов. Общие требования
Б.1.1 Исходныйматериалдля культивирования тест-организмов Poeclliareticulate Petersполучают влабора
ториях. занимающихся тестированием, имеющих рыб требуемой видовой принадлежности. Чувствительность
суточной молоди (мальков), указанныхвыше рыб кмодельномутоксикантудолжна соответствовать установленно
му в настоящем стандарте диапазону ЛК50 за 24 ч (метод А) и за 96 ч (метод Б).
Тест-организмы культивируют в термостатированных аквариумах при температуре (25 ± 1) X и содержат а
помещении с регулируемой температурой (20 ± 2) X . Плотность посадки тест-организмов из расчета 1—2 дм3
культивационной воды на 1 экз.. производителей — не менее 4 дм3на 1 экз.
При этом обеспечивают естественное или искусственное освещение так. чтобы соблюдались следующие
периоды выдержки: 16ч — воздействие света при освещенности 500—1000 лк. 8ч — без воздействия света (в тем
ноте).
Тест-организмы и культивационная вода, в которой проводят их культивирование, должны содержаться а
емкостях (аквариумах) из химически инертного материала и достаточной вместимости (например, стеклянные
аквариумы или из органического стекла).
П р и м е ч а н и я
1 Тест-организмы — Аквариумные живородящие рыбки РовсШв reticulata Peters, имеют широкое географи
ческое распространение,обладают коротким жизненным циклом и требуют минимум пространства иоборудования
для культивирования ипроведения тестирования. Тест-организмы могут культивироваться постоянно влаборатор
ных условиях. Выдерживают значительные колебания солености.
2 Развитие рыб проходит через две стадии (мальки и взрослые особи). Мальки рождаются совершенно
сформированными. При температуре(25 г 1) X развитиемальковдо взрослой стадии проходитчерез4—6 мес.
Б.1.2 Вода для культивирования тест-организмов— по приложению В и 5.2 (далее — культивационная
вода) должна соответствовать условиям тестирования см. В.1 (приложение В).
Б.1.3 Емкости тщательно моют при каждой замене культивационной воды.
Б.1.4 В качестве корма для производителей используют сухой корм (дафнии, циклопы) или живой корм
(мотыль, трубочник, дафнии, циклопы).
Б.2 Условия подготовки к тестированию Poecllia reticulata Peters
Б.2.1 Процедура получения молоди для методов А и Б
Для тестирования используют суточных малькоа РовсШа reticulata Peters (синхронизированная культура),
которые получают в лаборатории от половозрелых самок.
Для получения молоди отбирают производителей не старше двух лет. Продолжительность жизни рыбок
Poecllia reticulata Peters в аквариумных условиях 3—3.5 года. Необходимо учитывать, что однажды оплодотворен
ная самка может нереститься несколько раз.
Каждую новую партию половозрелых самок подбирают по возрасту из одного помета. Используют мальков
после рождения при выживаемости не ниже 80 %. что определяет в дальнейшем физиологическую чувствитель
ность тест-организмов суточных мальков Poecllia reticulata Peters.
Тест-организмы для тестирования получают следующим образом:
- в емкость (аквариум) вместимостью 20 дм3 с культивационной водой из емкости с маточной культурой
(накануне постановкиопытов)отбирают производителей не старшедвухлетдля спаривания. Соотношение самцов и
самок 2:1.
- черезсутки послеоплодотворения самкупомещают вотдельную термостатированную нерестовую емкость
объемом не менее 4 дм3. В термостатированной нерестовой емкости самка находится примерно от трех до пяти
суток, за указанное время в организме самки происходит эндогенное развитие мальков.
Готовность самки к вымету мальков определяют по наличию хорошо заметного темного пятна перед аналь
ным плавником. При этом форма брюшка приближаетсякпрямоугольной ионостановитсянамного шире спины.
П р и м е ч а н и е — После окончания нереста самок изолируют, так как они поедают потомство.
Количество мальков, которое надо получить рассчитывают заранее. Например, для того чтобы получить для
тестирования 210 экз. рыбок, готовят к оплодотворению не менее трех самок, исходя из того, что одна оплодотво
ренная самка в среднем выметывает не менее 75 шт. молоди.
- через одни сутки мальков, по мере их вымета в течение суток, отбирают трубочкой и помещают в чистую
емкость с культивационной водой;
- затем суточных мальков (синхронизированную культуру) используют в эксперименте.
20