ГОСТ 3383В—2016
Одноканальным дозатором отбирают 20 мм3надосадочной жидкости, переносят ее в чистую пробирку
типа Эппендорф идобавляют 980 мм3 ИФА-буфера для разбавления проб.
Полученные растворы проб используются для проведения ИФА. Допускается хранение при ком
натной температуре (от 20 °С до 25 X ) не более 12 ч.
8.5 Приготовление промывочного раствора
Промывочный раствор готовят непосредственно перед использованием. Для приготовления про
мывочногорастворав колберазбавляютконцентрат промывочногораствора, входящегов состав испы
тательного комплекта, в дистиллированной воде в соотношении 1:20.
8.6 Подготовка к проведению определений весов и фотометра
Подготовку средств измерений выполняют в соответствии с эксплуатационной документацией.
Градуировочный график строят при каждом определении по разделу 9 и 10.1.
9 Порядок выполнения определения
9.1 В лунки планшета вносят по 100 мм3каждого градуировочного раствора глиадина массовой
концентрацией 0. 2, 10, 80 и 200 мкг/дм3. Экстракты анализируемой пробы, подготовленные по 8.4, в
количестве 100 мм3вносят в отдельныелунки. Содержимоепланшетаперемешивают круговымидвиже
ниями по горизонтальной поверхности.
9.2 Заклеиваютповерхностьпланшетапленкойдлязаклеиваниялунокиинкубируютвтермостате
при температуре (37 ± 2) °С в течение 30 мин. По окончании инкубации жидкость из лунок удаляют с
помощью водоструйного насоса. Лунки планшета промывают три раза, добавляя при этом вкаждуюлун ку
по 250 мм3промывочного раствора, приготовленного по 8.5.
9.3 Далее во все лунки вносятпо 100 мм3 раствора конъюгата антител к глиадинус пероксидазой.
Послеэтогозаклеиваютпланшетпленкойдля заклеивания иинкубируютего в течение30 минпритемпе
ратуре (37 L 2) X .
9.4 По окончании инкубирования содержимое лунок удаляют с помощью водоструйного насоса.
Лунки планшета промывают пять раз. добавляя при этом в каждую лунку по 250 мм3промывочного рас
твора. приготовленного по 8.5.
9.5 Далее во все лунки планшета вносят по 100 мм3раствора субстрата З.З’.б.б’-ТМБ. Планшет
инкубируют в течение 15 мин в защищенном от света месте при условиях, указанных в разделе 5. Далее во
все лунки планшета вносят 100 мм3 стоп-реагента и перемешивают круговыми движениями по гори
зонтальной поверхности в течение 10 с.
9.6 Измерение оптической плотности проводят с помощью фотометра при длине волны 450 нм в
соответствии с эксплуатационной документацией сразу после внесения стоп-реагента, но не позднее,
чем через 15 мин,
10 Обработка и оформление результатов определений
10.1 Для обработки результатов строят градуировочный график кусочно-линейной зависимости
оптической плотности градуировочных растворов от содержания глиадина: 0; 2; 10:80 и 200 мкг/дм3.
10.2 Расчетсодержанияглютенав продуктахпереработкизернаА. млн’1.проводятпоформуле
A = ti_50_i0 2(1)
1000
где А — содержание глютена, млн1;
В — содержаниеглиадинавэкстрактеанализируемойпробы, полученное поградуировочномугра
фику в соответствии с 10.1. мкг/дм3;
50 — коэффициент разбавления экстракта;
10 — коэффициент разведения пробы. см3/г;
1000 — коэффициент перевода микрограммов в миллиграммы;
2 — коэффициент пересчета с глиадина на глютен.
10.3 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое значение
результатов двух параллельных определений А. Окончательный результат содержания глютена округ
ляют до целого числа.
4