ГОСТ Р 57200—2016
средой, разбавленной вдвое стерильной дистиллированной водой в соотношении одна капля суспензии
на 10 см3раствора или среды.
5.5.2.5 Приготовление разведений стандартного раствора витамина В2
Перед приготовлением стандартного раствора витамина В2 определяют его содержание в
кристаллическом цианокобаламине или в его растворе на спектрофотометре.
Для этого около 0.1 г кристаллического цианокобаламина. взвешенного с погрешностью не более
0.0001 г,растворяют в бидистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 см3 идоводят объем
раствора до метки.
25 см3полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3и доводят объем
раствора бидистиллированной водой до метки. Оптическую плотность определяют на спектрофотометре
при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
Массовую долю цианокобаламина (X) в процентах вычисляют по формуле:
(0-500-10)(1)
Л
“(207 т )
где D— оптическая плотность испытуемого раствора;
207 — удельный показатель поглощения Е]*и чистого безводного цианокобаламина при длине волны
361 нм;
т — масса навески, г.
Раствор цианокобаламина из ампулы разводят бидистиллированной водой до содержания около
0.02 мг цианокобаламина в 1см3, измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофо
тометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
В качестве контрольного раствора применяют бидистиллированную воду. Содержание цианокоба
ламина (X,) в мг в см3вычисляют по формуле;
_
(D-1Q-V,)(2)
А<” (207-V) ’
где V, — конечный объем раствора, см3:
V— объем раствора цианокобаламина. взятый для разведения, см3.
Стандартный раствор готовят из расчета 10 мкг витамина В2на 1 см3бидистиллированной воды.
Раствор хранят в холодильнике втемной стеклянной посуде с притертой пробкой подслоем толуола
в течение месяца. По истечении срока хранения раствор подлежит проверке на спектрофотометре по
методике для раствора цианокобаламина.
Вдень опыта раствор разводят в 2*105раз (последовательно в 100.100. а затем в 20 раз). Затем
из этого разведения готовят четыре рабочих разведения и одно контрольное. Каждое из них готовят в
трех повторностях, для чего в 15 пробирок (по три для каждого разведения и контроля) пипеткой
вносят по 5см3основной среды и следующие количества раствора витамина В2:0.0; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0 см3.
Затем объем содержимого кахщой пробирки доводят до 10 см3добавлением дистиллированной воды.
5.5.2.6 Подготовка исследуемой пробы кормового витамина В2для анализа
Навеску препарата массой 1 г. взвешенную с погрешностью не более 0.0001 г. измельчают и
суспензируют в 50 см3дистиллированной воды. Длястабилизации добавляют 0.05-0.10 г азотистокислого
натрия или 1-2 см30.02%-ного раствора цианистого калия и несколькими каплями 1н. соляной кислоты
доводят pH суспензии до 5.0 - 5.5. Избыток кислоты нейтрализуют 0.5 н. раствором едкого натра.
Затем суспензию кипятят в течение 20 мин на водяной бане или помещают в автоклав на 15 мин
при давлении 0.5 -1.0 кгс/см2, после чего охлаждают.
Охлажденную суспензию переносят в мерную колбу вместимостью 100см3, доводят pH до 6,8-7,0
добавлением 0.5 н. раствора едкого натра и 1 н. раствора соляной кислоты и доливают колбу дистил
лированной водой до метки.
Смесьфильтруют через бумажный фильтри часть профильтрованного экстракта разбавляют водой
до концентрации приблизительно 0.02-0.05 мг витамина В2 на 1 см3.
6