ГОСТ Р 57200—2016
5 5.2.7 Приготовление контрольной пробы
В исследуемой пробе может содержаться метионин, к которому чувствителен штамм Е. coli 113-3.
поэтому проводят контрольный анализ исследуемого экстракта, где витамин В2 предварительно
разрушают. Для этого 5 см3 экстракта смешивают с 5 см3 0,2 н. едкого натра и кипятят в течение 20
мин на водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения раствор нейтрализуют добав
лением 1н. соляной кислоты и разбавляют водой до такой же степени, как и в опыте с неразрушенным
витамином В2.
5.5.2.8 Приготовление разведений исследуемого раствора кормового витамина В2
Из исследуемой пробы готовят три разведения (вдвухповторностях каждое), длячего в6 пробирок
(по две для каждого разведения) вносят по 5 см3основной среды и следующие количества экстракта:
0.5; 1.0: 2.0 см1. Кроме того, готовят три разведения контрольного раствора. Для этого в три
пробирки вносят по 5 см3 основной среды и следующие количества контрольного раствора: 3; 4; 5
см3. Затем объем содержимого каждой пробирки доводят до 10 см3 добавлением дистиллированной
воды.
5.5.3 Проведение испытания
Испытание состоит из составления калибровочной линии для чистого витамина В2и непосред
ственного испытания исследуемой пробы.
Пробирки с разведением стандартного и исследуемого растворов помещают в автоклав на 20 мин
при давлении 1кгс/см2. после чего охлаждают. Затем засевают каждую пробирку одной каплей бактери
альной суспензии (приготовленной по 5.5.2.4) и ставят в термостат на 20 - 24 ч при температуре 37
°С.
По истечении указанного времени пробирки прогревают в автоклаве текучим паром 15 мин
и охлаждают. После охлаждения содержимое пробирок взбалтывают и измеряют мутность на
фотоэлектроколориметре или нефелометре. При использовании фотоэлектроколориметра замеры
делают при синем светофильтре. Контрольным раствором для определения мутности является
дистиллированная вода.
По полученным данным на миллиметровой бумаге строят калибровочный график. На оси ординат
откладывают значение мутности для каждого стандартного разведения (среднее из трех пробирок), а на
оси абсцисс соответствующее количество витамина В2.При соединении полученных точек получают
калибровочную линию.
При незначительном разбросе точек калибровочную линию проводят между ними на расстоянии,
равноудаленном от большинства точек.
5.5.4 Обработка результатов
Содержание витамина В2определяют отдельно в каждой пробирке исследуемой пробы при помощи
калибровочной линии. Данные, которые не укладываются в калибровочную линию, отбрасывают. По
данным, которые уложились в линию (не менее двух разведений), определяют количество витамина
В2 в исследуемой пробе, затем вычисляют среднее арифметическое результатов двух разведений.
Если наблюдается рост бактерий в контрольных пробирках, где витамин разрушен, то находят по
калибровочному графикусоответствующие ростузначения, которые вычитают из найденного количества
витамина В2в исследуемой пробе.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух
параллельных определений.
Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны
превышать 4.5 отн. %. Погрешность метода —
±
15 %.
П р и м е ч а н и е — При разногласиях между поставщиками и потребителем и при поставке продукции на
экспорт определение массовой доли витамина В2проводят с использованием цианистого калия.
5.6 Определение безвредности
5.6.1 Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
- шприц медицинский инъекционный типа «Рекорд» по ГОСТ 22967;
- ступку по ГОСТ 9147;
- воду питьевую по ГОСТ Р 51232.
5.6.2 Проведение испытания
Для проведения испытания отбирают пять цыплят 6-8-недельного возраста массой по 400-600 г
или пять белых мышей массой по 18 - 20 г.
7