ГОСТ Р 57198—2016
5 г препарата помещают в ступку и растирают при добавлении 25 см3раствора соляной кислоты
концентрации 0.2 моль/дм3. Суспензию переносят в колбу, ступку обмывают 25 см3раствора соляной
кислоты концентрации0.2 моль/дм3итакже сливают в колбу. Колбу закрывают пробкой, ставят нааппа
ратдля встряхивания на30 мин. Затем содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр.
Фильтрат используютдля проведения испытания.
5.6 2.2 Подготовка хроматографической камеры
В камеру или эксикатор ставят стаканчик со смесью растворителей, состоящей из бутанола-1,
пиридина, уксусной кислоты и воды в соотношении 15:10:3:12. На дно камеры кладут фильтровальную
бумагу, смоченную этойже смесью.
5.6.2.3 Подготовка хроматографической бумаги
Из листа хроматографической бумаги вырезают кругидиаметром 28—32 см (в зависимости от раз
мера камеры). Из центра круга циркулем проводят окружность радиусом 2 см. Круг делят на шесть раз
ных секторов, в центре круга делают отверстие диаметром 0.5 см для фитиля, который скручивают из
кусочкафильтровальной бумаги.
5.6.2.4 Подготовка газонадля биоавтографии
Встеклянный лоток наливают 100 см3голодной агаровой среды х и 80 см3 питательной агаровой
среды стест-культурой Вас. subtilis 6633.
5.6.3 Проведение испытания
5.6.3.1 На два противоположных сектора круга (на отрезокдуги внутренней окружности) микропи
петкой наносят раствор стандартного образца лизин в соляной кислоте концентрации 0.01 моль/дм3в
количестве 0.1 см3.Таким же образом наносят растворы двух испытуемых проб. Для кормовой концен
трат лизина-40 объем наносимой пробы составляет 0.025 см3, для кормовой концентрат лизи на-
10— 0.1 см3. При нанесении проб хроматограммы периодически просушивают феном. После
нанесения проб вотверстиев центредиска вставляютфитильихроматограммупомещают вкамерутак,
чтобы фитиль был погружен в растворитель.
Для лучшего разделения компонентов гризинового комплекса хроматографирование проводят в
течение 15— 16 ч. После окончания процесса хроматограмму вынимают из камеры и высушивают в
вытяжном шкафу. Затем хроматограмму разрезают подиаметру надве части, так чтобы в каждой из них
был сектор со стандартным образцом исекторы сдвумя исследуемыми образцами.
5.6.3.2 Одну половину хроматограммы проявляют биоавтографическим способом, для чего из
каждогосектора хроматограммы в радиальном направлении вырезаютполоски шириной0.5 см и накла
дывают их на газон с тест-культурой параллельнооднадругой на расстоянии 2см. совмещая их старто
вую линию. Наобратнойстороне лотка отмечаютстартовую линию и положение каждой полоски. Через
3—5 мин полоски снимаютпинцетом.
Лотокс газоном помещают в термостатс температурой 37 X на 18—20 ч.
5.6.3.3 Вторую половину хроматограммы опрыскивают 0,25 %-ным раствором нингидрина в эта
лоне с 1%-ным раствором уксусной кислоты ивысушиваютв вытяжном шкафу. Из нингидриноокрашен-
ных полосок хроматограммы стандартного образца и соответствующих им полосок хроматограммы
испытуемых проб в радиальном направлении вырезаютквадраты размером 0,5 х 0.5 см инакладывают их
на газон стест-культурой. Лоток с газоном помещают в термостатс температурой 37 X на 18—20 ч.
5.6.4 Обработка результатов
Появление нингидриноокрашенных компонентов на хроматограмме, совпадающих по положению
с нингидриноокрашенными компонентами стандартного образца лизин, а также зон задержки роста
тест-культуры от испытуемых компонентов пробы свидетельствует о подлинности препарата.
5.7 Определение токсичности
5.7.1 Аппаратура
Ступка фарфоровая по ГОСТ9147.
Шприц по ГОСТ 22967.
Иглы инъекционные по ГОСТ25377.
Водадистиллированная по ГОСТ6709.
5.7.2 Проведение испытания
Препарат тщательно растирают в ступке при непрерывном добавлении воды с таким расчетом,
чтобы 1см3суспензии содержал 200 мг препарата.
Отбирают пять мышей массой 18—20 гивводят перорально каждой мыши по0.5 см3суспензии (из
расчета 100 мг препарата на мышь) с помощью инъекционной иглы, на которую направляют оливудиа
метром не более 1мм.
ю