ГОСТ Р 57198—2016
Среда агаровая питательная: готовят аналогично приготовлению агаровой голодной среды, при
этом взамен воды берут МПБ с содержанием аминногоазота 50—60 мг в 100 см3бульона. Питательную
среду стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при температуре (110 11) °С. После стерилизации
pH раствора должна быть 7.8—8.0. Раствор хранят втечение месяца при комнатной температуре.
Раствор физиологический.
Агармясо-пептонный (МПА) — средадля культуры Вас. subtilis 6633; готовятследующимобразом:
МПБ разбавляют водой в соотношении 1:2. К 1000 см3 разбавленного МПБдобавляют 20 гагара, взве
шенногос погрешностью неболее0.01 г.Для набухания агарасмесьвыдерживаютв течение40—60 мин
при комнатной температуре.
МПА расплавляют на водяной бане, устанавливают pH 7,2—7,4 при помощи 30 %-ного раствора
гидрооксида натрия, дают среде отстояться в течение 30 мин. после чего среду фильтруют через тол
стый слой ваты, затем разливают в колбы истерилизуютпри температуре (110 ♦ 1) °Св течение 30 мин.
pH среды после стерилизации должен быть 7.2—7.4.
Средудля выращивания спор Вас. subtilis 6633 в матрицахготовят следующим образом:
25 гагара, взвешенногос погрешностью неболее 0,01 г. добавляютна 1000 см3 бульона Хоттинге-
рассодержанием 30—35% аминногоазота. Полученную средуразливаютпоматрицам истерилизуютв
течение 30 мин при температуре (110 i 1) °С. pH после стерилизациидолжен быть 6.0—6,2.
Суспензию тест-культуры Вас. subtilis 6633 готовятследующим образом:
тест-культуруВас. subtilis6633 переносят микробиологическойпетлей в пробирку сфизиологичес
ким раствором, затем пипеткой каплю полученной суспензии переносят в чашки Петри со средой МПА.
растираютее почашке стеклянным шпателем, после чего этим же шпателем переносятоставшуюся на
нем культуруизчашки вчашкус вышеуказаннойсредойпутем растирания (5—7чашек),добиваясьтаким
образом в последующем роста отдельных характерныхколоний.
Тест-культуру выращивают при температуре 37 °С в течение 18—24 ч. Затем отбирают типичные
колонии — мелкие, сероватые с зубчатым краем и пересевают бактериальной петлей на скошенный
МПАв пробирку ивыращиваетпри температуре 37 5Св течение 18ч. послечего культурусо скошенного
агара смывают 5—10 см3стерильнойдистиллированной воды исмыв переносятв матрацы. Засеянный
матрац выдерживают при температуре 37 °С в течение 5—7 суток, после чего производят микроскопи
ческий контроль и. если в мазках, окрашенных по Граму, имеется в поле зрения 80—90 % спор, делают
смыв культуры стерильнойдистиллированной водой.
Полученнуювзвесьспорпрогревают притемпературе60—70 °Сна водяной банев течение 30 мин,
затем взвесь спор промываютне менеетрех разстерильнойдистиллированной водой при центрифуги
ровании до полной прозрачности надосадочной жидкости. Промытую взвесь спор хранят в стерильной
дистиллированной водев запаянныхампулахили пробиркахвтечениедвухлет при температуре от 4 °С
до 10 °С.
Лизин основной стандартный раствор концентрации 1000 ЕД в 1см3; раствор готовят следующим
образом: 20 мг стандартногообразца лизин, взвешенные с погрешностью не более0.0002 г. растворяют в
рассчитанном объеме раствора соляной кислоты концентрации 0.01 моль/дм3.
Объем раствора соляной кислоты (Х3)в кубическихсантиметрах вычисляют поформуле
(3)
X , =
1000
гдеme — масса стандартного образца сульфата лизин, мг;
А — активностьстандартногообразца сульфатализин. ЕД в 1мг(весовоевыражение 1ЕДактивно-
сти сульфата лизин зависит от активности действующего в настоящее время стандартного
образца);
1000 — активность основного стандартного раствора сульфата лизин. ЕД в 1см3.
Полученный раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре 4 °С в защищенном от
света месте неболее одного месяца.
Лизин рабочий стандартный раствор концентрации 3 ЕД в 1см3;готовят следующим образом:
1см3основного стандартногораствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3,доводят
до метки лимоннокислым буферным раствором, получая разведение 1:100 (10 ЕД в 1см3). Затем берут
пипеткой 3 см3этого разведения, помещают в пробирку, добавляют 7 см3лимоннокислого буферного
раствора.
5.5.2 Подготовка киспытанию
5.5.2.1 Приготовлениераствора испытуемого препарата
5 г пробы, взвешенной с погрешностью не более 0.01 г. помешают в ступку, заливают 25 см3соля
ной кислоты концентрации0.2 моль/дм3 ирастираютпестиком. Затем взвесьпереносятв колбуили ста-
7