ГО СТ 14109— 2016
Раствор хранят при температуре от 2 вС до 25 °С в течение года.
6.8.2.2 Получение бактериальной массы возбудителя сапа для изготовления эмульсин-антигена
Для получения бактериальной массы культуру возбудителя сапа
В. mallei
выращивают в плоских
матрацах вместимостью 1.5 дм3 на МПА с добавлением от 2 % до 4 % глицерина. pH среды 6.8— 7.0 ед.
pH. Посев производят суспензией двухсуточной культуры, выращенной в пробирках на МПА с 2 % — 4
% глицерина и смытой стерильным физиологическим раствором в количестве от 10до 12 см3.
Суспензией культуры из каждой пробирки засевают по одному матрацу, для чего над пламенем
горелки переливают содержимое пробирки в матрац, затем покачиванием распределяют суспензию по
всей поверхности питательной среды. Выращивание культуры проводят при температуре 37 вС в тече
ние 4 сут. затем все матрацы просматривают визуальное проходящем и отраженном свете. Матрацы со
слабым ростом культуры или контамииироеанные посторонней микрофлорой не используют.
В матрацы с чистой культурой вносят асептически по 50— 60 см3 стерильного физиологического
раствора, в который предварительно добавляют 0,5 % фенола (по объему). Матрацы выдерживают в
течение 30 мин в наклонном положении, обеспечивающем смачивание всей поверхности посева. Затем
покачиванием матраца смывают культуру с поверхности агара и сливают в отдельный чистый матрац
через воронкус одним слоем марли. Полученную взвесь культуры стерилизуют автоклавированием при
температуре 126 °С и давлении 1.5 атм в течение 30 мин.
Суспензию культуры возбудителя сапа проверяют на стерильность по ГО СТ 28085. Стерильная
суспензия культуры может хранитьсяпритемпературе от 6 °Сдо 8 °С ииспользоватьсядля изготовления
сапного эмульсин-антигена в течение года.
6.8.2.3 Изготовление сапного эмульсин-антигена
Предварительно готовят адъювант, смешивая в стакане гомогенизатора минеральное масло и
ланолин безводный, разогретый до жидкого состояния в объемном соотношении 85:15. стерилизуют
автоклавированием при температуре 121 “С и давлении 1,1 атм в течение 2 ч. Влажный осадок бактери
альной массы, полученный центрифугированием суспензии термоинактивированной культуры возбуди
теля сапа по 6.8.2.2, и адъювант смешивают в стакане гомогенизатора в соотношении 1:1 в течение 10
мин при частоте вращения 5000 об/мин и переливают в стерильные флаконы вместимостью 10 или 20 см3,
которые укупоривают стерильными резиновыми пробками.
Готовый антиген проверяют на стерильность по ГО СТ 28085.
Сапной эмульсин-ангиген хранятпритемпературе от 6 °Сдо 8 °С втечение года. Перед применени
ем антиген нагревают в водяной бане при температуре (37 ± 1) еС и тщательно взбалтывают.
6.8.2.4 Сенсибилизация морских свинок
Морских свинок-альбиносов или с белым окрасом на боках сенсибилизируют путем введения
0,1 см3сапного эмульсин-антигена, приготовленного по 6.8.2.3, взаднебедренные мышцы. Через месяц
животных используют для контроля маллеина. Морских свинок используют пять-шесть раз с месячным
интервалом при условии сохранения у них в предыдущем испытании хорошо выраженной чувствитель
ности к маллеину в разведении 1:50. Животных, не имеющих или утративших чувствительность к этой
дозе препарата, не используют.
6.8.2.5 Приготовление раствора стандартного образца
Пробы стандартного образца для введения морским свинкам готовят растворением содержимого
флакона (ампулы)лиофилизированного стандартного образца всоответствии суказанием наэтикетке и
последующим разведением полученного раствора стерильным физиологическим раствором с pH
(7.0 ♦0.2) ед. pH в соотношении 1:5 и 1:50.
6.8.3Проведение испытаний
Для проверки каждой серии маллеина берут 10— 12 морских свинок.
Для введения маллеина истандартного образца используют шприцы вместимостью 1см3.Каждую
дозу испытуемой серии маллеина истандартного образца вводят отдельным шприцем, маркированным
в соответствии с дозой препарата (1,2.3.4). Расстояние между точками инъекций с одной стороны тела
животного должно быть не менее 5 см.
У морских свинок удаляют с боков шерсть выщипыванием по ходу роста волос или выбриванием,
затем в эти участки коживводятвнутрикожнопо 0,1 м3 стандартного образца вразведении 1:5(доза 1)и в
разведении 1:50 (доза 2), а также испытуемую серию маллеина в разведении 1:5 (доза 3) и в разведении
1:50 (доза 4) в условные точки инъекций а. б. в. гпо скользящей схеме в соответствии с таблицей 2.
7