ГОСТ 33608— 2015
7.3Подготовленную пробупомещают встеклянную банку вместимостью 250— 500 см3и закрыва
ют крышкой.
Допускается хранить подготовленную пробу в замороженном состоянии без доступа кислорода
при температуре не выше минус 18 °С не более 7сут.
8 Подготовка к испытанию
8.1 Приготовление растворов
8.1.1 Приготовление растворов стеринов массовой концентрации 0,5 мг/см3
Взвешивают 25,0 мг индивидуального фитостерина (брассикастерина. кампестерина. стигмасте-
рина, p-ситостерина), переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3идоводят до метки метанолом.
Растворы хранят в холодильнике при температуре минус (18 ± 2)X в течение 1мес.
8.1.2 Приготовление смеси градуировочных растворов стеринов
Дляопределения стеринов изиндивидуальных растворов массовой концентрации 0,5 мг/см3гото
вят смесь градуировочных растворов массовой концентрации 100 мкг/см3(раствор 1). 50 мкг/см3(рас
твор 2), 25 мкг/см3(раствор 3). 10 мкг/см3(раствор 4), 1мкг/см3(раствор 5).
Для приготовления раствора 1 градуированной пипеткой в мерную колбу вместимостью 50 см3
переносят соответственно по 10 см3индивидуального раствора стерина итщательно перемешивают.
Для приготовления градуировочного раствора 2 в хроматографическую виалу переносят 0.5 см3
градуировочного раствора 1и0,5 см3метанола.
Для приготовления градуировочного раствора 3 в хроматографическую виалу переносят 0.5 см3
градуировочного раствора 2 и0,5 см3метанола.
Для приготовления градуировочного раствора 4 в хроматографическую виалу переносят 0.2 см3
градуировочного раствора 2 и0.8 см3метанола.
Для приготовления градуировочного раствора 5 в хроматографическую виалу переносят 0.1 см3
градуировочного раствора 4 и0,9 см3метанола.
Растворы хранят в холодильнике при температуре (4 * 2) °С в течение 7сут.
8.1.3 Приготовление раствора гидроокиси калия молярной концентрации
с(КОН) = 10,0 моль/дм3
Взвешивают 56,0 г гидроокиси калия, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3,растворя
ют вдистиллированной воде идоводят объем до метки.
Готовый раствор хранят в конических колбах с притертыми пробками, при комнатной температуре
не более месяца.
8.2 Подготовка пробы
8.2.1 Щелочной гидролиз пробы
Пробу продукта массой 5— 10 г выделяютжир по ГОСТ 23042 гексаном или петролейным эфиром.
Полученныйжирпомещаютв круглодонную колбусо шлифом вместимостью 100 см3идобавляют 10см3
раствора гидроокиси калия (см. 8.1.3). Колбу соединяют с обратным холодильником, помешают в водя
ную баню инагреваютпри температуре (80 ± 2) X в течение 30 мин. периодически перемешивая содер
жимое колбы. После этого содержимое колбы охлаждаютдо комнатной температуры.
8.2.2 Экстракция стеринов
В колбу приливают 40 см3дистиллированной воды и 30 см3диэтилового эфира, перемешивают,
сливают в делительную воронку вместимостью 500 см3и дают отстояться в течение 5 мин. После рас
слаивания нижний водно-спиртовой слой сливают в коническуюколбу вместимостью 100 см3,а верхний
эфирный слой оставляют в делительной воронке. Переливают водно-спиртовой слой в другую дели
тельную воронку, добавляют 30 см3диэтилового эфира, встряхивают, отстаивают в течение 5 мин и
после расслаивания верхний эфирный слой приливают к эфирному экстракту в первой делительной
воронке.-
Эфирный экстракт промывают дистиллированной водой, не взбалтывая, порциями по 50 см3,
отбрасывая нижний водный слой, повторяя данную процедурутрижды.
Промытый эфирныйэкстракт фильтруютвкруглодонную колбувместимостью 100 см3черезсклад
чатый фильтр со слоем безводного сернокислого натрия (10— 15г), помещенный в коническую воронку.
Эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 30 °С под вакуумом.
Сухой остаток растворяют в 0,5 см3метанола, пропускают через мембранныйфильтр и переносят
в виалу из темного стекла вместимостью 2 см3для проведения измерения.
4