ГОСТ 33442—2015
с выпаренным растворителем, в течение примерно 2 мин для удаления воздуха. Аликвотные пробы
хорошо перемешанного ила, например 100 мл. вносят в тестовые сосуды, используя пипетку с широ
ким наконечником или мерный цилиндр. Важно заполнить пипетку в один прием до точного требуемо го
объема ила. поскольку взвешенные твердые частицы ила быстро оседают. Если забирается ббль-шее
количество ила. то следует освободить пипетку и начать наполнение снова.
8.13.2Затем в тестовые сосуды добавляют достаточное количество раствора субстрата (8.6) с
получением концентрации 2 r/л из питательного бульона, дрожжевого экстракта и D-глюкозы в смеси,
продолжая продувать сосуды азотом. Ниже приведен пример тестируемых партий.
Т а б л и ц а 2 — Тестируемые партии
концентрация тести
руемого вещества
о
тестовых сосудах,
мг
In
Конечная массоваяОбъем тестируемого вещества, млРеактивы и среды, мл
Основной
раствор а) 10 г/л
(9.7.1)
Основной
раствор а) 1 г/л
19.7.1)
Вода для
разведения (9.3)
Инокулят (9.5)
Субстрат (9.6)
2
—
—
2
—
2
2
0
0.1
0.33
—
—
2
0
1
3.3
10
33
100
0,1
0.33
1,0
—
1.0
0.9
0,67
0,9
0.67
0
100
100
100
100
100
100
2
Общий объем сосуда - 160 мл. Объем жидкости - 103 мл.
Объем газа - 57 мл или 35.6 % от общего объема.
8.13.3Аналогичным образом следует тщательно продуть азотом пустые тестовые сосуды для
летучих веществ и нерастворимых жидких тестируемых веществ (8.12.2).
8.14 Контрольные сосуды и стандартное вещество
8.14.1 Готовят не менее трех параллельных сосудов, содержащих только ил и субстрат, для ис
пользования в целях контроля проведения испытания. Готовят дополнительные параллельные сосу
ды. содержащие ил. субстрат, а также достаточное количество основного раствора стандартного ве
щества. 3.5-дихлорфенола (8.8). с получением конечной концентрации 150 мг/л. Данная концентрация
должна ингибировать образование газа примерно на 50 %. В альтернативном случае готовят ряд кон
центраций стандартного вещества. Кроме того, для измерения pH готовят четыре дополнительных
сосуда, содержащие ил. бескислородную воду и субстрат. В два сосуда добавляют тестируемое ве
щество в самой высокой тестовой концентрации, в оставшиеся два сосуда добавляют бескислород
ную воду.
8.14.2 Необходимо убедиться, что все сосуды - с тестируемым и стандартным веществами -
содержат одинаковый объем жидкости Vrf, при необходимости для получения необходимого объема в
сосуды добавляют бескислородную деионизированную воду (8.3). Свободное пространство должно
составлять от 10 % до 40 % объема сосуда, фактическое значение выбирают поданным, полученным
в предварительном испытании. После добавления в сосуды всех составляющих компонентов удаля
ют иглу для подачи газа, и каждый сосуд закрывают резиновой крышкой и алюминиевой скобой
(8.1, Ь). смочив пробку каплей деионизированной воды для облегчения ее установки. Содержимое
каждого сосуда перемешивают путем встряхивания.
8.15 Инкубация сосудов
Сосуды переносят в термостат, регулируемый с помощью термореле и предпочтительно снаб
женный встряхивающим устройством, и инкубируют при температуре (35
а
2) СС. Инкубацию проводят в
темноте. Примерно через 1 ч выравнивают давление в сосудах до атмосферного давления введе нием
иглы шприца, соединенной с манометром (см. 8.1, с), через крышку в каждой бутыли, открывают клапан до
нулевого показания манометра и затем закрывают. Иглу следует вставлять под углом при мерно 45 иС
для предотвращения утечки газа из сосудов. Если сосуды инкубируют без встряхиваю щего устройства,
то встряхивание проводят вручную два раза в донь в течение всего периода инку бации для
уравновешивания системы. Сосуды инкубируют и переворачивают для предотвращения утечки газа
через крышку. Однако переворачивание не подходит для тех случаев, когда нераствори мые
тестируемые вещества могут прилипать к нижней части сосуда.
7